Введение
Глава 1 .Культура клеток и тканей растений - как источник биологически активных соединений 8
1.1 . Каллусная ткань в изолированной культуре 14
1.2.Вторичный метаболизм в растениях in vivo и in vitro 16
1.2.1.Продукты вторичного метаболизма в культуре ткани Catharanthus roseus Ц
1.3 .Условия и способы культивирования растительных клеток и синтез биологически активных веществ 18
І.ЗЛ.Физико-химические факторы среды 20
1.4.Элиситоры как индукторы вторичного метаболизма в клеточной культуре ткани 39
1.4.1 .Механизмы воздействия элиситоров на биосинтетические способности растительной клетки 42
1.4.2.Воздействие элиситоров на регуляцию метаболизма алкалоидов 47
1.5.Способы культивирования и их влияние на вторичный синтез в культуре ткани 59
1.5.1 .Культивирование интактных растений 5 9
1.5.2.Глубинное культивирование клеток растений в жидкой питательной среде (суспензионные культуры) 60
1.5.3.Культивирование иммобилизованных клеток 62
Выводы 65
Глава 2.Объект и методы исследования 68
2.1 . Объект исследования 68
2.2.Введение в культуру Catharanthus roseus L. 70
2.3.Получение каллусных тканей Catharanthus roseus L. 71
2.4.Получение суспензионной культуры 73
2.5.Иммобилизация тканей Catharanthus roseus L. на инертный носитель 74
2.6.Методы оценки физиологического состояния культуры 75
2.7.Определение содержания тяжелых металлов 77
2.8.Элиситоры в качестве биотического воздействующего фактора в культуре ткани Catharanthus roseus L. 79
2.9.Определение содержания протеина в каллусных тканях Catharanthus roseus 80
2.10.Определение флавоноидов в каллусной ткани Catharanthus roseus L. 80
2.11.Определение сапонинов 81
2.12.Количественное определение свободных аминокислот 82
2ЛЗ.Определение суммарного содержания алкалоидов 83
2Л4.Разделение алкалоидов Catharanthus roseus L. высокоэффективной жидкостной хроматографией 84
2.15.0пределение содержания хлорофилла 85
2.16.Определение ферментативной активности ферментов шикиматного пути хинатдегидрогеназы и шикиматдегидрогеназы 85
2.17.Определение химического состава плодового тела гриба Pleurotus ostreatus (FrKumm) 87
2.18.Методы исследования водных экстрактов древесной зелени 89
2.19.Культивирование дереворазрушающего высшего гриба Pleurotus ostreatus (Fr. Kumm) на послеэкстракционном остатке каллусной ткани Catharanthus roseus L. 92
Глава 3 .Введение в культуру Catharanthus roseus Ь. 93
З 1 .Получение интактных стерильных растений Catharanthus roseus L. в культуре in vitro 93
3.2.Получение каллусной ткани и суспензионной культуры Catharanthus roseus L. 100
3.3 .Влияние физико-химических параметров на процессы роста и развития каллусной ткани Catharanthus roseus L. 110
З.З.І.Влияние уровня освещенности на процессы роста и развития каллусной ткани Catharanthus roseus L. 110
3.3.2.Влияние концентраций сахарозы на рост и развитие каллусной ткани Catharanthus roseus L. 112
З.З.З.Влияние инозита и гидролизата казеина на рост ткани и накопление алкалоидов 117
З.ЗАВлияние гормонального состава среды на рост и развитие каллусной ткани Catharanthus roseus L. 122
З.З.З.Влияние модуляторов вторичного метаболизма на активности ключевых ферментов шикиматного пути 135
З.З.б.Влияние минерального состава среды на рост и структуру каллусной ткани Catharanthus roseus L. 137
3.3.7.Влияние фосфатного компонента на рост каллусной ткани и накопление алкалоидов 156
Глава 4,Способы получения клеточной культуры Catharanthus roseus L. 165
4.1 .Суспензионная культура Catharanthus roseus L. 165
4.2.Иммобилизация каллусной ткани Catharanthus roseus L. на
пенополиуретановые пластины 176
4.3.Влияние способа культивирования на рост и развитие каллусной ткани Catharanthus roseus L. 178
Глава 5.Влияние элиситоров различной природы на биосинтетическую способность клеточной культуры Catharanthus roseus L. 186
5.1 .Динамика роста и накопление индольных димерных алкалоидов в клеточной культуре Catharanthus roseus L. под действием элиситоров мицелиальных, дрожжевых грибов и хвойных экстрактов
5.2.Качественный и количественный состав свободных аминокислот в каллусной ткани Catharanthus roseus L. 199
5.3.Содержание биологически активных веществ в каллусной ткани Catharanthus roseus L. после элиситации 202
5.4.Активность ферментов шикиматного пути 207
5.5.Химический состав плодового тела гриба Pleurotus ostreatus (Fr. Kumm) 208
5.6.Состав водных экстрактов древесной зелени сосны 216
5.7.Питательная среда на основе хвойного водного экстракта сосны 219
Глава 6.Проблема регуляции и стратегии контроля процессов вторичного синтеза в культуре in vitro 222
Глава 7.Технология получения алкалоидов из растительного сырья 237
7.1 .Технологический процесс получения каллусной ткани и алкалоидов из каллусной ткани Catharanthus roseus L. 238
7.2.Оптимизация процесса извлечения алкалоидов из каллусной ткани Catharanthus roseus L. 242
7.2.1.Химический состав каллусной ткани Catharanthus roseus L. после культивирования дереворазрушающего гриба Pleurotus ostreatus
(Fr Kumm) 246
ВЫВОДЫ 249
ЛИТЕРАТУРА 252
ПРИЛОЖЕНИЯ 278
