Введение
Обзор литературы 5
Основной принципы врожденного и приобретенного иммунитета 6
Рецепторы и лиганды, вовлеченные в неклональныи иммунный ответ 7
Гуморальный иммунный ответ 13
Опухолевые антигены, кодируемые нормальными клеточными генами 14
Опухолевые антигены, кодируемые мутантными клеточными генами 17
Опухолевые антигены, кодируемые вирусными генами 19
Клеточный иммунный ответ 23
T лимфоциты 24
Натуральные киллеры и лимфокин-активированные киллеры 26
Макрофаги 27
Факторы, ограничивающие эффективность действия противоопухолевого иммунитета 28
Клональные делеции и игнорирование 29
Изменения в экспресии молекул MHCI 29
Селективная потеря антигена или эпитопных вариантов 30
Антигенная модуляция 31
Иммунологическое усиливание и блокирующие факторы 31
Агрессивное поведение самой опухоли 32
Белковые факторы, продуцируемые в процессе иммунного ответа: сигналы опасности 34
Прямое цитолитическое действие на чужеродный антиген 34
Хемоаттракция (хемотаксис) 38
Стимуляция клональных Т- и В- лимфоцитов и клеток врожденного иммунитета 38
Общая характеристика и свойства цитокинов 40
Семейство интерферонов 42
Семейство фактора некроза опухоли 51
Генная терапия и генная терапия опухолевых заболеваний 59
Системы переноса генов 61
Клинические исследования: мишени, результаты и извлеченные уроки 62
Клинические исследования 63
Клиническая и техническая применимость 65
Использование генов для терапии опухолевых заболеваний 66
Материалы и методы исследования 70
Ферменты и реактивы 70
Клеточные линии и первичные культуры клеток 70
Выделение нейтрофилов и лимфоцитов человека 71
Плазмидные и фаговые векторы 72
Штаммы бактерий 72
Трансформация клеток Е. Coli 72
Выделение плазмидной ДНК 74
Определение первичной последовательности ДНК 75
Выделение тотальной РНК 76
Реакция обратной транскрипции и амплификация фрагментов KflHKtag7 76
Нозерн- и Саузерн- блот гибридизационный анализ 79
Экспрессия рекомбинантного белка 82
Получение поликлональной антисыворотки и очистка антител 82
Иммунопреципитация белка Тад7 из клеточных лизатов и кондиционной среды83
Электрофорез белков в полиакриламидном геле и Вестерн-блот- анализ 83
Анализ мультимерной структуры белка Тад7 84
Иммуногистохимический анализ 85
Определение цитотоксической активности 87
Электронно-микроскопический анализ опухолевых срезов 88
Получение стабильно трансфецированных клонов 88
Получение клеточной вакцины, модифицированной генами in vitro 89
Анализ скорости роста опухолей in vivo 90
Результаты исследования и их обсуждение 92
Клонирование и изучение генов tag7 млекопитающих 92
Новое семейство генов млекопитающих, имеющих лизоцим-подобный домен 124
Разработка моделей генной терапии опухолей 130
Разработка противоопухолевой вакцины на основе аутологичных клеток, модифицированных геном tag7 на мышиных моделях 141
Протокол клинических испытаний I фазы 148
Выводы 170
Благодарности 172
Список литературы 173
