Введение
1. Обзор литературы 15
1.1. Физиологически активные пептиды в нервной системе беспозвоночных 15
1.1.1. Нейропептиды семейства CNP 16
1.1.2. Эволюционый аспект функционирования нейропептидов 24
1.2.0бщее строение медицинской пиявки 30
1.2.1. Нервная система медицинской пиявки 32
1.2.1.1. Идентифицированные нейроны сегментарных ганглиев. 36
1.2.1.2. Идентифицированные нейроны субэзофагеального ганглия 41
1.2.2. Лакунарная (сосудистая) система медицинской пиявки 48
2. Методика 57
2.1. Животные и препарирование 57
2.2. Иммуноблоттинг 59
2.3. Иммуногистохимия 63
2.4. Электрофизиология 65
3. Результаты. 68
3.1. Поиск гомологичных CNP полипептидов в белковых фракциях, выделенных из нервной системы беспозвоночных разных типов...68
3.2. Поиск CNP-иммунореактивных клеток в нервной системе медицинской пиявки 71
3.2.1. Иммуногистохимическое окрашивание нервной системы медицинской пиявки whole-mount 72
3.2.1.1.Исследование различий в уровне иммунореакции при окрашивании антителами к пептидам CNP4 и CNP2...72
3.2.1.2.Влияние модулирующих воздействий на уровень иммунореакции 73
3.2.2. Иммуногистохимическое окрашивание нервной системы медицинской пиявки на последовательных срезах 73
3.3. Идентификация CNP-иммунореактивных клеток в нервной системе пиявки 79
3.3.1. Анализ распределения CNP-иммунореактивных клеток в нервной системе пиявки и сопоставление с картой расположения нейронов 79
3.3.2. Разработка и применение метода относительных автофлуоресцентных ориентиров 84
3.3.3. Исследование природы CNP-иммунореактивности в межсегментарных коннективах 90
3.3.4. Эксперименты с двойным мечением нейронов пиявки 93
3.3.4.1. Двойное мечение нейронов субэзофагеального ганглия...93
3.3.4.2. Двойное мечение нейронов других ганглиев 94
3.3.5. Идентификация CNP-иммунореактивных нейронов 254, 226, 227 сегментарных ганглиев 100
3.4. Исследование физиологических эффектов пептида CNP4 в нервной системе пиявки 104
3.4.1. Аппликация пептида CNP4 в модели сенситизации моносинаптических ответов 104
3.4.2. Аппликация пептида CNP4 на полуинтактных препаратах «сердце-мозг». 107
4. Обсуждение результатов 112
4.1. Поиск гомологичных CNP полипептидов в белковых фракциях, выделенных из нервной системы беспозвоночных разных типов. 112
4.2. Поиск CNP-иммунореактивных клеток в нервной системе медицинской пиявки 114
4.2.1. Иммуногистохимическое окрашивание нервной системы медицинской пиявки whole-mount 114
4.2.1.1. Исследование различий в уровне иммунореакции при окрашивании антителами к пептидам CNP4 и CNP2...114
4.2.1.2. Влияние модулирующих воздействий на уровень иммунореакции 114
4.2.2. Иммуногистохимическое окрашивание нервной системы медицинской пиявки на последовательных срезах 116
4.3. Идентификация CNP-иммунореактивных клеток в нервной системе пиявки 117
4.3.1. Анализ распределения CNP-иммунореактивных клеток в нервной системе пиявки и сопоставление с картой расположения нейронов 117
4.3.2. Разработка и применение метода относительных автофлуоресцентных ориентиров 118
4.3.3. Исследование природы CNP-иммунореактивности в межсегментарных коннективах 119
4.3.4. Эксперименты с двойным мечением нейронов пиявки 121
4.3.4.1. Двойное мечение нейронов субэзофагеального ганглия 122
4.3.4.2. Двойное мечение нейронов других ганглиев 123
4.3.5. Идентификация CNP-иммунореактивных нейронов 254, 226 и 227 сегментарных ганглиев 124
4.4. Исследование физиологических эффектов пептида CNP4 в нервной системе пиявки 126
4.4.1. Аппликация пептида CNP4 в модели сенситизации моносинаптических ответов 126
4.4.2. Аппликация пептида CNP4 на полуинтактных препаратах «сердце-мозг» 128
Заключение 135
Выводы 139
Список использованных источников 140
Благодарности. 153
