Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Модели, используемые для анализа молекулярно-клеточных механизмов обучения 12
1.1.1. Выработка ассоциативного обучения у моллюска Pleurobranchaea caUfornica 13
1.1.2. Выработка различных форм обучения у моллюска Aplysia 14
1.1.3. Выработка ассоциативного обучения у моллюска Lymnaea stagnalis. . 17
1.1.4 Выработка ассоциативного обучения у моллюска Hermissenda
crassicornis 18
1.2. Виноградная улитка (Helix) 19
1.2.1. Устройство ЦНС Helix 20
Церебральные ганглии 21
Париетовисцералъный комплес 24
1.2.2. Выработка неассоциативных и ассоциативных форм обучения у Helix 27
1. 3 Метаболизм и функции серотонина в ЦНС 29
1.4. Рецепторы 5-НТ. 33
1.4.1 Семейство 5-НТ1 33
Рецептор 5-НТ1А 34
1.4.2 Семейство 5-НТ2 36
1.4.3 Рецептор 5-НТЗ 37
1.4.4 Рецепторы 5-НТ4, 5-НТ6, 5-НТ7. 37
1.4.5 Семейство 5-НТ5 38
1.4.6 Рецепторы 5-НТу моллюсков 38
1.5. Участие митогенактивируемых (МАРК) каскадов в
механизмах нейрональной пластичности 39
1.5.1. Митогенактивируемый протеинкиназный каскад ERK1/2 41
Функции MAPK/ERK-каскада 42
1.5.2. Участие MAPK/ERK в механизмах пластичности у
позвоночных животных 44
1.5.3. Механизмы активации MAPK/ERK-сигнального каскада 46
1.5.4. Стрессовые протеипкиназы JNKup38 47
1.6. ДНК-связывающие транскрипционные факторы. 50
1.6.1. Транскрипционные факторы, регулирующие экспрессию генов через SRE - элемент 51
1.6.2. Транскрипционные факторы семейства CRE 53
1.6.3. Транскрипционные факторы семейства АР-1 58
1.6.4. Транскрипционные факторы семейства С/ЕВР 61
2. Материалы и методы 63
2.1. Выработка условного оборонительного рефлекса . 63
2.2. Вестерн-блот анализ. 65
2.2.1 Экстракция белков. 65
2.2.2 Метод Вестерн блот анализа. 65
Микровариант Вестерн-блот анализа 66
2.3. Выделение РНК. 67
2.4. Синтез копии ДНК. Реакция обратной транскрипции (RT) 68
2.5. Полимеразная цепная реакция, ПЦР (PCR) 69
2.6. Иммуноцитохимический анализ. Модификация In home. 69
ГЛАВА 3. Результаты. 71
3.1. Сравнительный анализ экспрессии МАРК/ERIC в ЦНС виноградной улитки и высших позвоночных животных (крыса) 71
3.2. Анализ экспрессии и активации МАР-киназ ERK в функционально различных ганглиях ЦНС виноградной улитки при обучении 73
3.2.1. Анализ активации протеипкиназы MAPK/ERK при формировании условного оборонительного рефлекса пищевой аверзии в париетовисцеральном ганглии виноградной улитки в разные сроки после обучения 74
3.2.2 Анализ активации МАР-киназ ERK-к в париетовисцеральном комплексе ганглиев виноградной улитки при обучении после введения неиротоксина 5,7-ДОТ. 75
3.2.3 Исследование содержания и активации МАР-киназ ERK в педальном комплексе ганглиев виноградной улитки в разные сроки после обучения 77
3.2.4 Анализ активации MAPK/ERK в педальном комплексе ганглиев виноградной улитки при обучении после введения неиротоксина 5,7-ДОТ. 79
3.2.5 Исследование экспрессии и активации МАР-киназ ERK в церебральном ганглии виноградной улитки при обучении. 80
3.2.6 Исследование функционирования MAPK/ERK-каскада в идентифицируемых нейронах ЦНС виноградной улитки при обучении .85
3.3. Влияние серотонина на активацию MAPK/ERK в идентифицируемых нейронах виноградной улитки 89
3.4. Сравнение активации MAPK/ERK при обучении ювенилъных и взрослых Helix 91
3.5. Анализ активации транскрипционного фактора Elk-1 при формировании условного оборонительного рефлекса пищевой аверзии в париетовисцеральном ганглии Helix, у животных с нормальной и нарушенной способностью к обучению 93
3.6. Серотониновый рецептор 5-НТ1А (SR-1A) в ЦНС Helix 96
Заключение. 98
Выводы. 99
Список литературы 101
