Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Использование генетических маркеров для изучения генетического разнообразия пород лошадей 9
1.1.1. Биохимические маркеры 9
1.1.2. Метод амплификации ДНК при помощи полимеразной цепной реакции 11
1.1.3. Микросателлиты 12
1.1.4. Полиморфные маркеры, основанные на тестировании однонуклеотидных замен (SNPs) 14
1.1.5. Мул ьтил окусные ДНК-маркеры 17
1.1.5.1. RAPD маркеры 17
1.1.5.2. Полиморфизм длин продуктов амплификации (AFLP-маркеры) 19
1.1.5.3. ISSR-фингерпринтинг 20
1.1.6. Анализ нуклеотидных последовательностей мтДНК 22
1.2. Лошади и их генетическое разнообразие 25
1.2.1. Происхождение и одомашнивание лошади 25
1.2.3. Современное коневодство Российской Федерации 41
1.2.4. Генетическое разнообразие лошадей 43
1.2.5. Аборигенные породы лошадей Саяно-Алтайского региона 51
1.2.5.1. Монгольские лошади 52
1.2.5.2. Бурятские лошади 55
1.2.5.3. Тувинские лошади 56
1.2.5.4. Забайкальские лошади 57
1.2.5.5. Алтайские лошади 58
2. Материалы и методы 60
2.1. Объекты исследования 60
2.2. Реагенты 61
2.3. Оборудование 62
2.4. Выделение ДНК 62
2.5. Определение концентрации выделенной ДНК 64
2.6. Проведение ПЦР 64
2.7. Приготовление 2%-ного агарозного геля 65
2.8. Электрофоретическое разделение продуктов ПЦР 65
2.9. Определение размера и количества фрагментов в ISSR-ампликонах 66
2.10. Секвенирование гипервариабельного района мтДНК 67
2.11. Определение нуклеотидной замены (g.66493737C T) в гене миостатина 68 методом TaqMan Realime PCR
2.12. Статистическая обработка 70
3. Результаты исследования и их обсуждение 72
3.1. Сравнение информативности различных ISSR маркеров 72
для оценки генетического разнообразия лошадей 3.1.1. Характеристика спектров ISSR фрагментов, полученных с праймерами к динуклеотидным повторам 72
3.1.2. Характеристика спектров IS SR фрагментов, полученных с праймерами к тринуклеотидным повторам 79
3.2. Оценка генетического разнообразия лошадей с использованием ISSR-маркеров 83
3.3. Анализ нуклеотидных последовательностей D-петли мтДНК лошадей 105
3.4. Изучение частоты встречаемости однонуклеотидной замены (g.66493737C T) в первом интроне гена миостатина (MSTN) 113 Заключение 118
4. Выводы 121
Список использованной литературы 123
