Введение
1 Обзор литературы 15
1.1 Номенклатура стероидов 15
1.2 Биосинтез и метаболизм стероидов 16
1.3 Определение стероидов в моче 19
1.3.1 Гидролиз коньюгатов стероидов 19
1.3.2 Методы определения эндогенных стероидов 20
1.3.3 Проблема количественного анализа эндогенных стероидов 22
1.4 Стероидный профиль 23
1.4.1 Исследование стероидного профиля 23
1.4.2 Стероидный профиль и основные метаболиты 26
1.4.3 Стероидный профиль и минорные метаболиты 27
1.4.4 Стероидный профиль и генетика 29
1.4.5 Стероидный профиль и разбавление мочи... 30
1.4.6 Популяционные нормы концентраций и соотношений эндогенных стероидов в моче 31
1.4.7 Переход от популяционных границ к индивидуальным 34
2 Оборудование, исходные вещества и методика эксперимента 39
2.1 Оборудование 39
2.2 Исходные вещества и материалы 39
2.3 Приготовление растворов и буферов 47
2.3.1 Приготовление раствора внутреннего стандарта метилтестостерона 47
2.3.1.1 Приготовление рабочего раствора метилтестостерона 47
2.3.2 Приготовление буферной смеси 48
2.3.3 Приготовление фосфатного буфера 48
2.3.4 Приготовление карбонатного буфера 48
2.3.5 Приготовление концентрированного раствора для дериватизации 49
2.3.6 Приготовление модельных растворов для оптимизации условий хроматографического разделения 49
2.3.7 Приготовление градуировочных растворов 49
2.3.7.1 Приготовление растворов 1 группы 50
2.3.7.2 Приготовление растворов 2 группы 51
2.3.7.3 Приготовление растворов 3 группы 52
2.3.7.4 Приготовление растворов 4 группы 52
2.3.7.5 Приготовление растворов 5 группы 53
2.3.8 Подготовка матриц для проведения градуировки 53
2.3.8.1 Подготовка матрицы мочи без стероидов, содержащихся в свободной фракции - «свободная моча» 53
2.3.8.2 Подготовка матрицы мочи, прошедшей через патрон для твердофазной экстракции - «ТФЭ моча» 54
2.4 Подготовка пробы мочи для анализа и проведения градуировки 54
2.4.1 Подготовка пробы мочи 54
2.4.2 Подготовка пробы для проведения градуировки 55
2.4.3 Препараты эндогенных стероидов, использованные в работе 55
2.5 Прием препаратов эндогенных стероидов 55
2.6 Статистические программы и математические модули, используемые в работе 56
3 Результаты и обсуждение 57
3.1 Разработка способа определения эндогенных стероидов в моче 57
3.1.1 Выбор температурной программы и хроматографической колонки 57
3.1.2 Определение времен удерживания и характеристичных ионов 57
3.1.3 Масс-спектры исследуемых соединений 60
3.1.4 Построение градуировочных зависимостей для количественного определения эндогенных стероидов 75
3.1.4.1 Выбор матрицы для построения градуировочных кривых 75
3.1.4.2 Сравнение коэффициентов чувствительности 76
3.1.4.3 Сравнение отношений эндогенных стероидов 81
3.1.5 Эффективность гидролиза и степень извлечения 85
3.1.6 Метрологическая аттестация разработанного способа анализа 86
3.1.7 Заключения об итогах исследований от лабораторий, аккредитованных ВАДА. Межлабораторная сходимость результатов 93
3.2 Статистический анализ полученных данных 99
3.2.1 Статистический анализ концентраций эндогенных стероидов 99
3.2.2 Статистический анализ данных соотношений эндогенных стероидов 105
3.2.3 Использование установленных популяционных пределов для определения приема запрещенных препаратов 107
3.2.3.1 Анализ проб после приема тестостерона 109
3.2.3.2 Анализ проб после приема дегидроэпиандростерона 113
3.3 Переход от популяционных границ к индивидуальным 115
3.3.1 Использование разработанной программы для определения приема запрещенных препаратов 116
3.3.1.1 Анализ проб после приема тестостерона 119
3.3.1.2 Анализ проб после приема дегидроэпиандростерона 126
3.4 Поиск новых значимых соотношений эндогенных стероидов 130
3.4.1 Анализ проб после приема тестостерона 132
3.4.2 Анализ проб после приема дегидроэпиандростерона 139
3.4.3 Установление популяционных границ для новых соотношений... 143
Заключение 145
Выводы 147
Список литературы
