Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы Опухолевая контаминация гемопоэтических продуктов — важная проблема аутотраисплантации и высокодозной химиотерапии у онкологических больных
1.1. Высокодозная химиотерапия 12
1.2 Аутотрансплантация стволовых клеток крови 15
1.3. Мобилизация стволовых гемопоэтических клеток 16
1.4. Особенности протоколов мобилизации СГК при ВХТ 19
1.5. Определение СГК с помощью экспрессии CD34 20
1.6. Резидуальные опухолевые клетки в костном мозге и периферической крови 22
1.7. Методы выявления резидуальных опухолевых клеток 23
1.8. Методы молекулярной биологии для выявления рсзидуальных опухолевых клеток 24
1.9. Иммунодиагностика опухолей человека 26
1.10. Характеристики МКАТ, предназначенных для очистки трансплантата 30
1.11. Очистка с помощью опосредованного комплементом лизиса 31
1.12. Очистка с помощью иммунотоксинов 33
1.13. Очистка с применением иммуномагнитных микросфер 34
1.14. Положительный отбор гемопоэтических клеток как альтернативный метод очистки 37
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1. Отбор пациенток для исследования 39
2.2. Сбор ПСК 39
2.3. Получение образцов КМ и ПСК от больных РМЖ 40
2.4. Получение образцов ПСК от доноров без онкопатологии 41
2.5. Проведение курсов ВХТ 41
2.6. Оценка реакции на проводимую терапию 42
2.7. Получение фракции мононуклеаров 42
2.8. Стандартный иммуноцитохимический анализ (ИЦА) 43
2.9. Селекция клеток, экспрессирующих CD34 45
2.10. Иммуноцитохимический анализ с иммунным обогащением на магнитных микросферах (ИЦА-ОММ) 45
2.10.1. Построение стандартных кривых анализа 48
2.11. Исследование клоногенного роста резидуальных опухолевых клеток in vitro 48
2 1 1.1. Идентификация колоний опухолевых клеток 49
2.12. Статистический анализ 49
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований
3,1. Исследование факторов, влияющих їй контаминацию продуктов гемопоэтических стволовых клеток у больных метастатическим раком молочной железы.51
3.11 Частота контаминации образцов ПСК и костного мозга 52
3.12 Исследование ассоциации между контаминацией костного мозга и контаминацией образцов ПСК 52
3.13 Исследование влияния схемы мобилизационной терапии на контаминацию образцов ПСК 52
3.14 Исследование влияния количества процедур лейкафереза на частоту контаминации образцов ПСК 55
3.1.5 Исследование контаминации образцов ПСК в зависимости от типа мобилизации у больных РМЖ с частичной и полной ремиссией 57
3.2. Опухолевая контаминация ПСК как фактор прогноза выживаемости без прогрессирования болезни и полной выживаемости больных РМЖ 58
3.2.1. Мультивариантный анализ взаимозависимости факторов прогноза 60
3.3. Исследование клоно ген ного роста опухолевых клеток-контаминант 62
3.4. Характеристика нового метода детекции опухолевых клеток в образцах ПСК: имму но цитохимического анализа с этапом иммунного обогащения на магнитных микросферах 64
3.4.1. Отработка и характеристика метода ИЦА с обогащением на магнитных микросферах (ИЦА-ОММ) 64
3.5. Исследование эффективности очистки продуктов ПСК от остаточных клеток рака молочной железы в результате позитивной селекции клеток на экспрессию CD34 61
3.5.1. Определение контаминации продуктов лейкафереза клетками РМЖ с помощью стандартного ИЦА 70
3.5.2. Определение контаминации продуктов лейкафереза клетками РМЖ с помощью ИЦА-ОММ 71
3.5.3. Количество опухолевых клеток в продуктах лейкафереза до селекции на CD34 как фактор прогноза контаминации СВ34-позитивных фракций 73
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 75
Выводы 86
Список литературы 87
