Введение
2. Обзор литературы 14
2.1. Ядро ооцита насекомых как модельная система. Классификация типов оогенеза насекомых 14
2.2. Структурно-функциональная организация ядер ооцитов 18
2.2.1. Особенности организации хроматина 18
2.2.1.1. Хромосомы типа ламповых щеток 18
2.2.1.2. Кариосфера в оогенезе насекомых 21
2.2.1.3. Амплификация рДНК в ооцитах насекомых 27
2.2.2. Внутриядерные тельца в ядрах ооцитов 30
2.2.2.1. Внутриядерные тельца в ядрах ооцитов амфибий 30
2.2.2.2. Внутриядерные тельца в ядрах ооцитов насекомых 32
2.3. Ядерные домены эукариотической клетки и их молекулярные компоненты 36
2.3.1. Перихроматиновые фибриллы 37
2.3.2. Роль РНК-пол II в координировании процессов созревания мРНК 39
2.3.3. Кластеры интерхроматиновых гранул 43
2.3.4. Тельца Кахала 48
2.3.4.1. Коилин 49
2.3.4.2. U7 мяРНП 54
2.3.4.3. Тельце Кахала и ядрышко 55
2.3.4.4. Тельце Кахала и биогенез сплайсосомных мяРНП 56
2.3.4.5. Тельце Кахала - динамичная структура 59
3. Материал и методика 61
3.1. Животные 61
3.2. Использование различных объектов для конкретных методических задач 61
3.3. Подготовка материала для флуоресцентной микроскопии 62
3.4. Антитела и ммунофлуоресцентное окрашивание препаратов 63
3.5. Микроинъекции 65 3.5.1. ШмяРНК 65 3.5.2.5-бромоуридин-5-трифосфат 66
3.6. Ингибиторный анализ 67
3.6.1. Актиномицин D 67
3.6.2. DRB 68
3.7. Светооптическая микроскопия 68
3.7.1. Флуоресцентная микроскопия 68
3.7.2. Конфокальная микроскопия 68
3.7.3. Микроскопия по Номарскому и выявление ДНК в нефиксированных ядрах 69
3.8. Электронная микроскопия 69
3.8.1. Стандартная электронная микроскопия 69
3.8.2. Иммуноэлектронная микроскопия 70
3.9. Электрофоретическое разделение белков и иммуноблоттинг 71
4. Результаты 72
4.1. Строение овариол домового сверчка. Морфодинамика ядерных структур ооцитов Acheta domesticus на диплотене
4.2. Оценка транскрипционной активности ядер ооцитов A. domesticus с помощью микроинъекций бромо-УТФ 79
4.3. Ультраструктурная организация телец Кахала в ооцитах домового сверчка 81
4.4. Идентификация и молекулярный состав телец Кахала в ооцитах домового сверчка 82
4.4.1. Вестерн-блотинг антител к коилину с экстрактами белков ооцитов насекомых 84
4.4.2. Иммуноцитохимическая идентификация телец Кахала в ооцитах 87
4.4.3. Идентификация телец Кахала с помощью микроинъекций U7 мяРНК 94
4.4.4. Иммунологическая характеристика телец Кахала ооцитов сверчка с помощью антител к факторам транскрипции, сплайсинга пре-мРНК и процессинга пре-рРНК 97
4.4.4.1. Фибрилларин - мажорный компонент телец Кахала ооцитов домового сверчка 97
4.4.4.2. Распределение факторов сплайсинга (мяРНП и SR-белка SC35) в составе сложных телец Кахала ооцитов домового сверчка. 97
4.4.4.3. Тельца Кахала ооцитов домового сверчка содержат коактиваторы транскрипции СВР/рЗОО и базальный фактор транскрипции TFI1D, но не содержат РНК-полимеразу II 98
4.5. Идентификация и ультраструктурная организация кластеров интерхроматиновых гранул в ооцитах насекомых
4.6. Особенности организации и молекулярного состава телец Кахала и кластеров интерхроматиновых гранул ооцитов в условиях подавления транскрипции с помощью ингибиторов
4.6.1. Морфологические эффекты действия DRB и актиномицина D на ядерные структуры ооцитов домового сверчка
4.6.2. Иммуноцитохимическая характеристика ядерных структур (телец Кахала и кластеров интерхроматиновых гранул) ооцитов домового сверчка при действии ингибиторов транскипции
4.6.3. Действие актиномицина D на ооциты моллюска Achatina fiilica 129
5. Обсуждение 138
5.1. О транскрипционной активности хромосом при автотрофном типе оогенеза
5.2. О ядрышковом аппарате ооцитов насекомых 139
5.3. Экстрахромосомные ядерные структуры ооцитов насекомых с паноистическими яичниками
5.4. Проблема идентификации экстрахромосомных ядерных структур в J43 ооцитах
5.5. Коилин как маркерный компонент телец Кахала 145
5.6. U7 мяРНК и тельца Кахала 148
5.7. О присутствии белка SC35 в тельцах Кахала ооцитов насекомых 149
5.8. Вьивление компонентов РНК-пол П-транскрипции в тельцах Кахала 151
ооцитов сверчка. Функции телец Кахала ооцитов
5.9. Кластеры интерхроматиновых гранул ооцитов насекомых 155
6. Выводы 160
7. Список литературы 162
