Введение
1. Актуальность проблемы 6
2. Цели и задачи работы 8
3. Научная новизна 9
4. Обзор литературы 10
4.1. Теломеры и их функция 10
4.2. Молекулярная организация теломерного повтора 13
4.3. Белки, связывающиеся с теломерами 18
4.4. Роль теломеразы в восстановлении теломерных
последовательностей 19
4.5. Альтернативные механизмы поддержания структуры теломер 24
4.6. Структура теломер в онтогенезе растений 28
4.7. Молекулярная организация субтеломерных повторов 30
4.8. Особенности организации теломерной ДНК у
Аспараговых (Asparagacea) 31
4.9. Особенности организации генома Луковых 36
4.9.1. Ботаническая характеристика лука-батуна (Л. fistulosum) 37
4.9.2. Практическая ценность использования Л. fistulosum в селекции
лука репчатого 37
4.9.3. Молекулярно-генетическая и цитогенетическая
характеристика A. fistulosum 39
4.10. Особенности молекулярной организации теломер у Allium 42
5. Материалы и методы 49
5.1. Растительный материал 49
5.2. Получение цитологических препаратов 49
5.3. Выделение ДНК 50
5.4. ПЦР-анализ 51
5.5. Гибридизация по Саузерну 53
5.6. Флюоресцентная in situ гибридизация (FISH) и получение растянутой ДНК 54
6. Результаты исследований 56
6.1. Геномная организация сателлитной ДНК 56
6.1.1. ПЦР анализ с праймерами на сателлитный повтор 56
6.1.2. Саузерн-гибридизация продуктов амплификации праймеров 34902 и 34903 58
6.1.3. Рестрикционный анализ 59
6.1.4. Саузерн-гибридизация продуктов амплификации праймеров 34905 и 34906 61
6.1.5. Саузерн-гибридизация с геномной ДНК A. fistulosum 62
6.1.6. Гибридизация in situ на растянутую ДНК A. fistulosum 63
6.1.7. ПЦР анализ несателлитной ДНК 64
6.1.8. Саузерн-гибридизация с ПЦР-продуктами праймеров 34905 и PR2 68
6.2. Изучение локализации продуктов амплификации на хромосомах A. fistulosum 68
6.3. Слот-блот анализ геномной ДНК A. fistulosum с
меченным теломерным повтором -TTAGGG 73
6.4. ПЦР анализ геномной ДНК с праймерами на теломерный повтор TTAGGG и TTTAGGG
6.5. Локализация продуктов амплификации праймеров HTelol и НТ1ео2 на хромосомах A. fistulosum 78
6.6. Сиквенирование продуктов ПЦР праймеров HTelol и НТе1о2. ...80
7. Обсуждение 84
7.1. Негомологичная рекомбинация в сателлитном повторе -механизм восстановления теломеры 84
7.2. Дрозофила-подобный механизм восстановления теломер 87
7.3. Восстановление теломер с помощью теломеразы 87
8. Выводы 93
9. Список использованной литературы 94
