Введение
Глава 1. Материалы и методы 14
1.1. Насекомые 14
1.2. Энтомопатогенные микроорганизмы и методы заражения насекомых. 15
1.3. Приборы и реактивы. 17
1.4. Исследование зараженных тканей насекомых. 18
1.5. Отбор гемолимфы и приготовление гомогенатов внутренних органов 19
1.6. Определение активности и спектра неспецифических эстераз, активности глутатион-Б-трансферазы . 20
1.7. Определение продукции активированных кислородных метаболитов 22
1.8. Определение активности супероксиддисмутазы и концентрации тиолсодержащих соединений. 24
1.9. Определение паттерн-распознаюших белков 24
1.9.1. Определение агглютинрующеи активности гемолимфы капустной совки. 24
1.9.2. Определение паттерн-распознаюших белков в гемолимфе большой вощиной моли. - 26
1.10. Определение белка 26
1.11. Статистическая обработка
экспериментальных данных. 27
Глава 2. Генерация активированных кислородных метаболитов у насекомых и ее изменение при различных патогенезах . 28
2.1. Источники и основные свойства АКМ. 29
2.1.1. Строение и свойства АКМ. 29
2.1.3. Источники АКМ в организме 34
2.1.4. Фенолоксидазоактивирующая система 37
2.2. Методические подходы при изучении активированных кислородсодержащих метаболитов .48
2.2.1. Люминол-зависимая хемилкзминесценция 49
2.2.2. Метод восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) 52
2.2.2.1. Влияние активаторов фагоцитоза на восстановление нитро-синего тетразолиевого в гемоцитах насекомых. 58
2.2.2.2. Влияние ингибиторов на восстановление НСТ в гемоцитах насекомых. 69
2.2.3. Метод спиновых ловушек. 78
2.3. Генерация активированных кислородных метаболитов при различных патогенезах. 87
2.3.1. Образование АКМ при микроспоридиозе насекомых..88
2.3.1.1. Влияние микроспоридиоза на фенолоксидазную активность гемолимфы. - 92
2.3.1.2. Влияние микроспоридиоза на восстановление нитросинего тетразолия в гемоцитах личинок G. mellonella 97
2.3.1.3. Окисление СР-Н гемолимфой личинок G. mellonella при микроспоридиозе 99
2.3.2. Изменение продукции АКМ насекомых при бактериозах. 104
2.3.2.1. Изменение продукции АКМ при инъекции бактерий в гемоцель насекомых. 105
2.3.2.2. Изменение продукции АКМ у личинок G. mellonella в течение бактериоза 115
2.3.3. Изменение продукции АКМ насекомых при микозах.. 120
2.3.4. Заключение 125
Глава 3. Детоксицируюшие ферменты насекомых . 128
3.1.1. Микросомальные монооксигеназы. 130
3.1.2. Неспецифические эстеразы насекомых. 131
3.1.3. Глутатион-3-трансферазы. 134
3.1.4. Факторы, влияющие на активность детоксицирующих ферментов 136
3.2. Изменение активности детоксицирующих ферментов насекомых при патогенезе 138
3.2.1. Влияние микроспоридиоза на спектр и активность неспецифических эстераз 139
3.2.1.1. Изменение активности и спектра эстераз гемолимфы G. mellonella 139
3.2.1.2. Изменение активности и спектра эстераз жирового тела G. mellonella 143
3.2.1.3. Изменение активности и спектра эстераз среднего кишечника личинок G. mellonella 144
3.2.1.4. Типирование неспецифических эстераз 152
3.2.1.5. Влияние микроспоридиоза на активность глутатион-Б-трансфераз 155
3.3. Влияние микозов на спектр и активность неспецифических эстераз 161
3.3.1. Типирование неспецифических эстераз при микозах.178
3.3.2. Влияние микозов на спектр и активность глутатион-S- трансфераз и микросомальных монооксигеназ 183
3.3.4. Изменение чувствительности G.mellonella к инсектицидам при микозах. 186
3.5. Влияние кристаллообразуюших бактерий на спектр и активность неспецифических эстераз личинок большой вощиной моли. 189
3.5. Заключение 195
Глава 4. Антиоксидантная система насекомых . 197
4.1. Ферментативные антиоксиданти. 197
4.2. Неферментативные антиоксиданты. 204
4.3. Активность антиоксидантов в тканях личинок G. mellonella при различных заболеваниях . 207
4.3.1. Влияние микроспоридиоза на активность супероксиддисмутазы, 207
4.3.2. Изменение концентрации тиолсодержащих соединений в гемолимфе G. mellonella при микроспоридиозе 214
4.3.3. Уровень и активность антиоксидантов в кишечнике личинок G. mellonella при перроральном инфицировании бактериями Bacillus thuringiensis ssp.galleriae 218
4.4. Заключение. 225
Глава 5. Паттерн-распознающие белки насекомых. 226
5.1. Агглютинины капустной совки. 232
5.2. Паттерн-распознающие белки большой вощиной огневки. 240
Заключение 246
Выводы. 255
Список литературы 255
