Введение
ГЛАВА 1. Состояние разработанности методов сохранения генетических ресурсов и криоконсервация эмбрионов млекопитающих 10
1.1. Хомячки рода Phodopus .10
1.2. Сохранение генетических ресурсов лабораторных животных
1.2.1. Лабораторные модели значимые для биомедицинских исследований 12
1.2.2. Сохранение генетических ресурсов лабораторных животных в виде криобанков 13
1.2.3. Теоретические основы программного замораживания и витрификации .15
1.2.4. Сохранение генетических ресурсов в виде гамет (семя, ооциты, яичниковая ткань) и преимплантационных эмбрионов
1.2.4.1. Замораживание семени .22
1.2.4.2. Замораживание ооцитов 24
1.2.4.3. Замораживание яичниковой ткани 25
1.2.4.4. Замораживание преимплантационных эмбрионов 26
1.2.5. Особенности криоконсервации эмбрионов и гамет различных зоологических таксонов .27
1.3. Культивирование эмбрионов млекопитающих in vitro 29
1.3.1. Культивирование эмбрионов in vitro и другие репродуктивные технологии .29
1.3.2. Питательные среды для культивирования преимплантационных эмбрионов 31
1.3.3. Особенности культивирования эмбрионов лабораторных животных 37
1.3.4. Влияние факторов роста на развитие преимплантационных эмбрионов 40
1.3.4.1. Цитокины как факторы роста 43
1.3.4.1.1. Группа воспалительных цитокинов .43
1.3.4.1.2. Группа противовоспалительных цитокинов .44
1.3.4.1.3. Группа регуляторов иммунитета 46
1.3.4.2. Гормональные факторы роста .47
1.3.5. Эффекты субоптимальных условий культивирования эмбрионов лабораторных
животных на формирование фенотипа рожденных особей 48
1.3.6. Факторы и приемы позволяющие оптимизировать условия пребывания эмбрионов
разных видов животных вне организма .49
ГЛАВА 2. Материалы и методы 52
2.1. Экспериментальные животные .52
2.2. Криоконсервация эпидидимального семени 52
2.2.1. Получение, замораживание и оттаивание эпидидимального семени .52
2.2.2. Оценка жизнеспособности семени .53
2.2.3. Морфологический анализ эпидидимального семени .54
2.3. Криоконсервация эмбрионов хомячков рода Phodopus 54
2.3.1 Спаривание самок-доноров и получение эмбрионов 54
2.3.2. Замораживание эмбрионов .55
2.3.3. Оттаивание эмбрионов 56
2.3.4. Оценка жизнеспособности преимплантационных эмбрионов после процедур замораживания-оттаивания .56
2.3.4.1. Оценка жизнеспособности эмбрионов методом двойного окрашивания флуоресцеином диацетатом и пропидия йодидом 56
2.3.4.2. Культивирование in vitro преимплантационных эмбрионов 57
2.3.4.3. Подсчет интерфазных ядер 58
2.3.4.4. Трансплантация эмбрионов .59
2.4. Статистический анализ .60
ГЛАВА 3. Криоконсервация сперматозоидов и эмбрионов хомячков джунгарского и кэмпбелла, и проверка их жизнеспособности после оттаивания in vitro и in vivo .61
3.1. Морфологические характеристики интактного эпидидимального семени у хомячков джунгарского и Кэмпбелла 61
3.2. Жизнеспособность интактного эпидидимального семени у хомячков джунгарского и Кэмпбелла .63
3.3. Криоконсервация эпидимального семени хомячков .64
3.4. Потенциальная и фактическая плодовитость хомячков P. sungorus и P. campbelli 67
3.5. Замораживание, криоконсервация и оттаивание эмбрионов хомячков рода Phodopus 67
3.5.1. Оценка жизнеспособности преимплантационных эмбрионов методом двойного
окрашивания флуорохромами FDA + PI 69
3.5.2. Оценка жизнеспособности преимплантационных эмбрионов хомячков P. sungorus и P. campbelli путем культивирования in vitro 72
3.5.3. Воздействие факторов роста на развитие преимплантационных эмбрионов хомячков рода Phodopus и подсчет интерфазных ядер 75
3.5.4. Оценка жизнеспособности эмбрионов мохноногих хомячков: развитие in vivo после трансплантации 77
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов .79
4.1. Особенности репродукции хомячков рода Phodopus 79
4.2. Криоконсервация эпидидимального семяни хомячков джунгарского и Кэмпбелла 79
4.3. Криобанк преимплантационных эмбрионов P. sungorus и P. campbelli и проблема сохранения генетических ресурсов лабораторных животных 81
4.4. Особенности культивирования in vitro преимплантационных эмбрионов Cricetinae 83
4.5. Влияние факторов роста на развитие преимплантационных эмбрионов млекопитающих 84
4.6. Трансплантация эмбрионов видов Cricetinae 85
Заключение 87
Выводы .88
Список цитируемой литературы
