Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Особенности биохимических нарушений при аллоксановом диабете 12
1.1.1. Понятие об аллоксановом диабете 12
1.1.2. Ультраструктурные изменения клеток животных при диабете и голодании 14
1.1.2.1. Гликоген как основной энергетический субстрат клеток при стрессовых условиях 14
1.1.2.2. Функционирование глиоксилатного цикла в тканях животных и человека 15
1.1.2.3. Процессы гликолиза и глюконеогенеза в тканях высших животных 18
1.2. Роль малатдегидрогеназы в регуляции метаболических процессов 22
1.2.1. Общая характеристика малатдегидрогеназной активности 22
1.2.2. Участие малатдегидрогеназы в метаболических процессах 23
1.2.3. Молекулярная масса и субъединичное строение 24
1.2.4. Каталитические свойства малатдегидрогеназы 25
1.2.4.1. Общая характеристика каталитического действия 25
1.2.4.2. Кинетические параметры 26
1.2.5. Влияние концентрации ионов водорода на активность малатдегидрогеназы 27
1.2.6. Влияние температуры на активность малатдегидрогеназы 28
1.2.7. Влияние интермедиатов и ионов на активность малатдегидрогеназы 28
1.2.8. Изоферментный состав малатдегидрогеназы 31
1.3. Механизмы адаптации животных к диабету 31
1.3.1. Ультраструктурные изменения клеток животных при диабете и голодании 31
1.3.2. Гормональная регуляция энергетического метаболизма у высших животных при пищевой депривации 36
1.3.3. Биохимические сведения о конверсии жирных кислот в углеводы в клетках высших животных 49
ГЛАВА 2. Экспериментальная часть 50
2.1. Объект и методы исследования 50
2.1.1. Объект исследования 50
2.1.2. Методы исследования 50
2.1.2.1. Контроль за индукцией диабета 50
2.1.2.2. Получение материала для исследования 51
2.1.2.3. Определение активности ферментов 51
2.1.2.4. Определение количества метаболитов 53
2.1.2.5. Определение количества белка 54
2.1.2.6. Методы хроматографического разделения изоформ малатдегидрогеназы 55
2.1.2.7. Электрофоретические исследования 56
2.1.2.7.1. Определение гомогенности ферментов 56
2.1.2.7.2. Специфическое проявление МДГ 56
2.1.2.7.3. Определение молекулярной массы субъединиц фермента методом Ds-Na ПААГ-электрофореза 57
2.1.2.8. Определение молекулярной массы нативного фермента 58
2.1.2.9. Исследование кинетических характеристик и регуляторнои активности изоформ фермента 59
2.2.3. Статистическая обработка данных 59
2.3. Полученные результаты и их обсуждение 61
2.3.1. Доказательство индукции аллоксанового диабета 61
2.3.2. Изменение активности некоторых метаболических путей
в печени крыс 61
2.3.3. Динамика содержания углеводов в тканях печени крыс с аллоксановым диабетом 64
2.3.4. Доказательство наличия трёх изоформ малатдегидрогеназы в печени крыс с аллоксановым диабетом 66
2.3.5. Очистка изоформ малатдегидрогеназы из печени крыс с аллоксановым диабетом 67
2.3.6. Электрофоретические исследования 69
2.3.6.1. Определение гомогенности фермента 69
2.3.6.2. Определение молекулярной массы субъединиц ферментов методом DS-Na ПААГ-электрофореза 71
2.3.7. Определение молекулярной массы малатдегидрогеназы 76
2.3.8. Кинетические и регуляторные характеристики изоформ малатдегидрогеназы 77
2.3.8.1. Отношение изоформ малатдегидрогеназы к концентрации субстрата 77
2.3.8.2. Определение константы Михаэлиса 79
2.3.9. Влияние концентрации ионов водорода 83
2.3.10. Влияние концентрации ионов магния 85
2.4. Влияние температуры на активность МДГ, выделенной из различных органоидов гепатоцитов крыс с аллоксановым диабетом 86
2.4.1. Термостабильность изоформ МДГ из гепатоцитов крыс 86
2.4.2. Температурный оптимум изоформ МДГ из гепатоцитов крыс 87
2.5. Строение и механизм действия активного центра малатдегидрогеназы 91
Заключение 102
Выводы 104
Список использованных источников 106
