Введение
II. Обзор литературы 9
Микробные биопленки: общая характеристика и функции 9
Внеклеточный биопленочный матрикс, его состав и роль отдельных компонентов 15
Мультимерные поверхностные клеточные структуры; роль в образовании биопленок 19
Участие катионов металлов в адгезии и образовании биопленок 20
Роль циклического димерного гуанозин монофосфата (c-di-GMP) в регуляции формирования биопленок 21
Биопленка Pseudomonas aeruginosa 23
Роль биопленок в инфекционном процессе. Резистентность бактерий, живущих в биопленках, к антибактериальным агентам 26
Методы борьбы с микробными биопленками: подходы к профилактике образования или
разрушения биопленок 33
Преимущества использования биопленок в биотехнологии 44
Quorum Sensing системы регуляции экспрессии генов бактерий 46
QS системы регулирования и формирование биопленки Agrobacterium tumefaciens 50
QS системы P. aeruginosa 52
Ингибиторы QS систем регуляции 58
III. Материалы и методы 63
1. Среды и условия культивирования 63
2. Штаммы, плазмиды и олигонуклеотиды 63
3. Определение продукции АГЛ 66
4. Определения действия исследованных веществ на /их-биосенсоры 67
5. Экстракция АГЛ из супернатантов культур и анализ экстрактов 69
6. Определение образования биопленок 70
7. Методы работы с ДНК 71
8. Перенос плазмид 72
9. Определение способности клеток бактерий к миграции по поверхности сред 72
10. Определение действия летучих органических соединений (ЛОС), продуцируемых
бактериями, и индивидуальных ЛОС на формирование биопленок и зрелые биопленки А.
tumefaciens С58 73
IV. Результаты з
4.1. Действие фенольных соединений на формирование биопленок P. aeruginosa РА01 и А.
tumefaciens С58 76
4.1.1. Образование биопленок P. aeruginosa РА01 и A tumefaciens С58 в присутствии растительных фенолов 77
4.1.2. Определение синтеза АГЛ штаммом P. aeruginosa РА01, при росте культуры на среде с различными концентрациями фенольных соединений 80
4.1.3. Действие фенольных соединений на биосенсоры на основе штаммов Escherichia coli, используемых для определения N-ацил-гомосеринлактонов 82
4.1.4. Определение способности клеток P. aeruginosa РА01 к миграции в различных концентраций фенольных соединений 83
4.2. Действие фитогормонов на формирование биопленок P. aeruginosa РА01 и А. tumefaciens С58 85
4.3. Действие пероксида водорода и параквата на формирование биопленок P. aeruginosa РАО 1 и A. tumefaciens С58 88
4.3.1. Образование биопленок P. aeruginosa РА01 и A. tumefaciens С58 в присутствии пероксида водорода и параквата 89
4.3.2. Влияние гена аііА, кодирующего гомосеринлактоназу, на образование биопленок P. aeruginosa РА01 91
4.4. Действие пероксида водорода на формирование биопленок Burkholderia cenocepacia 370 96
4.5. Действие летучих органических соединений (ЛОС), продуцируемых бактериями родов Pseudomonas и Serratia, и индивидуальных ЛОС на формирование биопленок и зрелые биопленки фитопатогенной бактерии A. tumefaciens С5Ъ 100
4.5.1. Определение действия ЛОС на функционирование Quorum Sensing систем регуляции 109
4.5.2. Определение влияния мутаций в генах, кодирующих порины OmpF и ОтрС, на чувствительность клеток Е. coli к ЛОС 114
V. Обсуждение результатов 117
VI. Выводы 127
VII. Список литературы
