Введение
Глава 1. Основные свойства комплексов фермент-полиэлектролит и возможности их использования в химическом анализе 9
1.1. Иммобилизация фермента путем его включения в полиэлектро литный комплекс- 10
1.2. Иммобилизация ферментов по технологии послойного нанесения пленок фермент-полиэлектролит 18
1.3. Применение полиэлектролитных пленок для создания биосенсоров- 25
Глава 2. Свойства и применение ферментов, модифицированных поверхностно-активными веществами и солюбилизованных в обращенных мицеллах 34
2.1. Каталитическая активность и стабильность ферментов, солюбилизованных в обращенных мицеллах ПАВ - 35
2.2. Применение комплексов фермент-ПАВ в качестве катализаторов в неполярных органических растворителях 53
2.3. Биосенсоры на основе солюбилизованных ферментов 59
Глава 3. Исходные вещества, посуда, аппаратура, обработка результатов измерений, методика эксперимента 66
3.1. Исходные вещества 66
3.2. Посуда, аппаратура 69
3.3. Методики эксперимента 70
3.4. Обработка результатов измерений 77
Глава 4. Включение пероксндазы в полиэлектролитный комплекс с хитозаном как средство повышения активности и стабильности фермента в водной и водно-органической средах 79
4.1. Обоснование выбора полиэлектролита для образования комплекса с пероксидазой 79
4.2. Получение полиэлектролитного комплекса пероксидаза-хитозан 84
4.2.1. Обоснование выбора индикаторной реакции для контроля активности пероксндазы в присутствии хитозана 84
4.2.2. Влияние хитозана на скорость реакции окисления о дианизидина пероксидом водорода- 85
4.2.3. Выбор оптимальных концентраций компонентов индикаторной реакции, катализируемой полиэлектролитным комплексом перокси-даза— хитозан 89
4.2.4. Влияние природы, рН и концентрации буферного раствора на xактивность полиэлектролитного комплекса пероксидаза-хитозан 89
4.3. Изучение кинетики реакции окисления о-дианизидина пероксидом водорода, катализируемой полиэлектролитным комплексом пероксидаза -хитозан 97
4.4. Влияние диметилсульфоксида на каталитическую активность иx стабильность полиэлектролитного комплекса пероксидаза-хитозан 97
Глава 5. Пероксидазное окисление фенотиазннов в водно-органических средах - 111
5.1. Ферментативное определение фенотиазннов по их пероксидазному окислению в водных растворах и в присутствии ДМСО- 113
5.2. Определение фенотиазннов в водных растворах и в присутствии ДМСО по их влиянию на скорость окисления о-Д пероксидом водорода, катализируемого полиэлектролитным комплексом пероксидаза -хитозан 124
5.3. Определение промазина в плазме крови 130
Глава 6. Аналитические возможности применения псроксидазы в средах прямых и обращенных мицелл ПАВ 134
6.1. Обоснование выбора поверхностно-активных веществ 134
6.2. Изучение механизма индикаторных реакций пероксидазного окисления о-дианизидина, 5,35,5-тетраметилбензидина и о-фенилендиамина в средах прямых мицелл ДДС и АОТ 138
6.3. Оптимизация условий проведения индикаторной реакции пероксидазного окисления о-дианизидипа в средах обращенных мицелл АОТ и ДДС 148
6.4. Изучение реакций окисления о-Д пероксидом водорода и органическими пероксидами, катализируемых пероксидазой в средах прямых и обращенных мицелл ПАВ- 154
6.5. Влияние второго субстрата-восстановителя и эффекторов накаталитическую активность пероксидазы в среде обращенных мицелл ПАВ 161
6.5.1. Влияние цистеина на каталитическую активность пероксидазы в водном растворе и в среде обращенных мицелл ПАВ 162
6.5.2. Влияние сульфаниламида на каталитическую активность пероксидазы в водном растворе и в среде обращенных мицелл ПАВ 166
6.5.3. Влияние имидазола на каталитическую активность пероксидазы в водном растворе и в среде обращенных мицелл ПАВ - 168
6.6. Ферментативное определение сульфаниламида, цистеина и имидазола в водном растворе и в средах прямых и обращенныхмицелл ДДС 173
6.7. Определение пероксида водорода и органических пероксидов в водном растворе и в средах прямых и обращенных мицелл ПАВ 175
6.8. Определение органических пероксидов в оливковом масле 178
Выводы 183
Список литературы 184
Приложение 210
