Введение
1. Обзор литературы: «определение структуры т-хелперных эпитопов и создание синтетических пептидных конструкций, содержащих эпитопы в-клеток и т-хелперных клеток»
1.1. Развитие иммунного ответа на введение пептидного фрагмента 7
1.2. Определение структуры Т-хелперных эпитопов. 9
1.2.1. Определение структуры Т-эпитопов с помощью рентгеноструктурного анализа.
1.2.2. Изучение связывания природных и синтетических пептидов с молекулой МНС II для определения структуры Т-эпитопов .
1.2.3. Теоретические методы предсказания потенциальных Т-эпитопов. 24
1.3. Синтетические пептидные конструкции, включающие в себя эпитопы В-клеток и Т-хелперных клеток
1.3.1. Введение Т-хелперных эпитопов в состав линейных пептидов. 31
1.3.2. Мультиантигенные пептидные комплексы, содержащие Т-хелперные эпитопы
1.3.3. Липопептидные конструкции, содержащие Т-хелперные эпитопы. 42
2. Результаты и обсуждение 46
2.1. Разработка метода предсказания аминокислотной 47
последовательности пептидов, способных индуцировать образование антител у мышей.
2.1.1. Анализ данных литературы о структуре Т-хелперных эпитопов и выявление общих закономерностей .
2.1.2. Применение условия 1-9 для анализа базы данных МНСРЕР 49 Т-хелперных эпитопов.
2.1.3. Применение условия 1-9 для анализа структуры ранее описанных пептидов.
2.2. Выбор иммуногенных пептидов в последовательностях белков ОраВ и NspA Nesseria meningitidis и белков Е и NS1 вируса клещевого энцефалита.
2.3. Моделирование иммуногенных пептидов из неактивных белковых последовательностей с использованием условия 1-9.
2.3.1. Создание высокоиммуногенных пептидов на основе неактивного фрагмента 223-242 и низкоактивного фрагмента 233-252 белка РогА Nesseria meningitidis.
2.3.2. Создание высокоиммуногенного пептида на основе низко активного фрагмента 346-363 белка РогА Nesseria meningitidis.
2.3.3. Создание иммуногенного пептида на основе неактивного фрагмента 178-199 белка РогА Nesseria meningitidis.
2.3 А. Создание иммуногенных пептидов на основе неактивного фрагмента 197-213 белка VPi вируса ящура
2.3.5. Исследование активности укороченного фрагмента 130-143 белка РогА Nesseria meningitidis, содержащего участок 1-9.
2.3.6, Создание иммуногенных пептидов на основе неактивного фрагмента 273-292 белка РогА Nesseria meningitidis.
2.4. Создание пептидных конструкций на основе иммуноактивных фрагментов белка VPi вируса ящура
2.5. Иммуногенные и протективные свойства синтетических пептидных конструкций.
2.5.1. Способность пептидных конструкций индуцировать образование антител у мышей.
2.5.2. Сравнение иммуногенных и протективных свойств пептидных конструкций на морских свинках.
2.5.3. Изучение протективной активности пептидной конструкции III на свиньях.
2.5.4. Изучение иммуногенных и протективных свойств синтетической пептидной конструкции IV.
3. Экспериментальная часть 89
3.1. Химические реагенты и биологические препараты 89
3.2. Оборудование 90
3.3. Животные 91
3.4. Приготовление растворов пептидов для иммунизации 91
3.5. Получение сывороток крови 91
3.6. Иммунизация животных 92
3.7. Твердофазный иммуноферментный анализ (непрямой метод) 95
3.8. Антигензависимая пролиферация клеток периферических лимфоузлов мышей, праймированных конструкцией IV.
3.9. Определение титра вируснейтрализующих антител 101
3.10. Исследование протективной активности. 101
3.11. Определение величины ПДы конструкции IV. 103
4. Выводы 104
5. Список литературы
