Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8
1.1. Адаптация клеток Escherichia coli к стационарной фазе роста, а - субъединица РНК-полимеразы 8
1.1.1. Общие механизмы адаптации микроорганизмов к стрессу 8
1.1.2. & -субъединица РНК-полимеразы 10
1.1.3. Транскрипционная регуляция а 12
1.1.4. Трансляционная регуляция rpoS 13
1.1.5. Регуляция стабильности RpoS-белка 14
1.1.6. Регуляция активности а 16
1.2. Механизмы адаптации Escherichia coli к кислотному стрессу 19
1.2.1. Условия развитию кислотного стресса in situ 19
1.2.2. Системы кислотоустойчивое Е. coli 20
1.3. Механизмы множественной устойчивости Escherichia coli к антибиотикам, основанные на ограничении их поступления в клетку и активном выбросе 23
1.3.1. Ограничение поступления ксенобиотков в клетку 23
Структурные особенности поринов 23
Регуляция пориноеого состава мембраны 24
1.3.2. Активный выброс из клетки. Многоцелевые системы выброса и их регуляция 25
1.4. Роль полиаминов в обеспечении процессов жизнедеятельности микроорганизмов 27
1.4.1. Виды биогенных полиаминов. Пути регуляции их внутриклеточной концентрации 27
1.4.2. Биосинтез и деградация полиаминов 28
1.4.3. Физиологическая роль полиаминов 30
Взаимодействие полиаминов с ДНК 31
Влияние полиаминов на биосинтез нуклеиновых кислот 32
Влияние полиаминов на белковый обмен 33
Взаимодействие с мембранами и регуляция синтеза фосфолипидов ЗА
Роль полиаминов в регуляции транспортных процессов 35
Роль полиаминов в адаптации к стрессу 35
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 39
2.1. Объекты исследования 39
2.2. Культивирование микроорганизмов 41
2.3. Определение активности р-галактозидазы 42
2.4. Определение содержания полиаминов в клетке и среде 43
2.5. Выделение плазмидной ДНК из клеток Е. coli 45
2.6. Трансформация Е. coli плазмидной ДНК 45
2.7. Транспортная активность пориновых каналов 46
2.8. Минимальная ингибиторная концентрация антибиотиков 49
2.9. Определение концентрации ацетата 49
2.10. Статистическая обработка 50
ГЛАВА 3. Полиамины как фактор регуляции экспрессии rpoS при переходе культуры Escherichia coli в стационарную фазу 51
3.1. Роль экзогенных полиаминов в регуляции транскрипции rpoS в зависимости от фазы роста периодической культуры Е. coli и глюкозного голодания 52
3.2. Полиамииы как фактор поеттранскрипциоппой регуляции rpoS 56
3.3. Роль полиаминов в регуляции экспрессии rpoSn клетках полиаминдефицитных мутантові?, coli 61
ГЛАВА 4. Роль полиамииов в адаптации Е. coli к кислотному стрессу 64
4.1. Влияние продуктов обмена Escherichia coli на экспрессию rpoS. 65
4.2. Зависимость экспрессии rpoS от органических кислот как продуктов обмена Е. coli 68
4.3. Полиамины как элемент системы адаптации клетки к кислотному стрессу, вызванному действием органических кислот 72
4.4. Зависимость внутриклеточного содержания полиаминов от экспрессии rpoS 75
ГЛАВА 5. Полиамииы как фактор устойчивости Е. coli к антибиотикам 77
5.1. Роль полиаминов в формировании антибиотикорезистентности Е. coli в условиях стрессовых воздействий 77
5.2. Зависимость внутриклеточного содержания полиаминов от действия антибиотиков 82
5.3. Эффект антибиотиков на уровень экспрессии rpoS 86
5.4. RpoS как фактор адаптации Е. coli к разным группа антибиотиков.„89 5.4. Ограничение проницаемости внешней мембраны Е. coli как механизм защиты от антибиотиков 90
ГЛАВА 6. Обсуждение результатов 94
6.1. Роль полиаминов в регуляции экспрессии rpoS при переходе культуры Escherichia coli в стационарную фазу 94
6.2. Путресцин как фактор адаптации Escherichia coli к кислотному стрессу 102
6.3. Полиамины как фактор развития множественной антибиотикоустойчивости Escherichia coli 110
Заключение 117
Выводы 120
Литература 121
