Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Биоматериаловедение - междисциплинарный подход к изучению полимеров 10
1.2. Полимеры медико-биологического назначения 12
1.3. Тканевая инженерия 15
1.3.1 Принципы и методы тканевой инженерии 15
1.3.2 Основные требования, предъявляемые к полимерам в тканевой инженерии 17
1.3.3 Синтетические биодеградируемые полимеры 19
1.4. Строение кожи и способы лечения повреждений кожного покрова 24
1.4.1 Строение кожного покрова 24
1.4.2 Строение коллагена и его свойства 28
1.4.3 Подготовка клеточного продукта для трансплантаций 31
1.4.4 Формирование полимерных матриц для культивирования, клеток 35
1.5 Взаимодействие клеток с полимерной поверхностью скаффолда...39
1.6 Модификация полимерного субстрата 41
1.6.1 Физические способы модификации 41
1.6.2 Химические способы модификации полимерной поверхности 44
Глава 2. Объекты и методы исследования 48
2.1. Приготовление материалов и реагентов 48
2.1.1 Синтез поли(0,Ь-лактида) 48
2.1.2 Формирование плёнок методом отлива из раствора 48
2.1.3 Получение тонких полимерных плёнок 49
2.1.4 Гидрофобизация покровных стёкол 49
2.1.5 Получение пористых плёнок из смеси полилактида (ПЛ) и полиэтиленгликоля (ПЭГ) 50
2.1.6 Получение коллагена 51
2.2. Модификация поверхности полилактидных пленок 52
2.2.1 Нанесение коллагена на полимерный субстрат 52
2.2.2 Аминолиз полилактидных плёнок 53
2.3. Методы исследования поверхности 54
2.3.1 Измерение гидрофильно-гидрофобных характеристик поверхности полимерной плёнки методом пластинок Вильгельми 54
2.3.2 Оценка количества растворённого ПЭГ по потере массы...55
2.3.3 Определение концентрации полиэтиленгликоля в водных растворах 56
2.3.4 Определение оксипролина в коллагене 56
2.3.5 Определение концентрации коллагена 57
2.3.6 Выявление структуры коллагена 58
2.3.7 Нингидриновый метод анализа 58
2.3.8 Ядерный магнитный резонанс 58
2.3.9 Сканирующая электронная микроскопия 59
2.4. Выделение клеток кожи и анализ их поведения на исследуемых субстратах 59
2.4.1 Выделение и культивирование первичных фибробластов. 59
2.4.2 Выделение и культивирование первичных кератиноцитов...59
2.4.3. Оценка состояния клеток на полимерных плёнках 60
2.4.4 Адгезия фибробластов 61
2.4.5 Анализ структуры актинового цитоскелета 61
Глава 3. Результаты 62
3.1. Синтез поли(Б,Ь-лактида) 62
3.2. Получение полимерных плёнок из полилактида разными способами 63
3.2.1 Плёнки, полученные методом полива из раствора 63
3.2.2 Полимерные плёнки, полученные на покровном стекле 64
3.3. Влияние условий получения полимерных плёнок на взаимодействие фибробластов с полимерной поверхностью полилактидной плёнки 67
3.4. Исследование деградации полилактидных матриц in vitro 76
3.5. Исследование деградации полилактидных плёнок in vivo 79
3.6. Модификация полилактидных плёнок 82
3.6.1 Нанесение коллагена на поверхность полилактидных плёнок 82
3.6.2 Влияние покрытия полимерных пленок коллагеном на поведение культивируемых кератиноцитов 91
3.7. Формирование пористых плёнок на основе смеси полилактида и полиэтиленгликоля 104
3.7.1 Исследование скорости растворения ПЭГ 105
3.7.2 Культивирование кератиноцитов на плёнках на основе смеси ПЛ и ПЭГ 111
3.7.3 Модификация коллагеном пористых плёнок и культивирование на них кератиноцитов 115
3.8. Модификация полилактидных плёнок раствором лизина 121
Глава 4. Обсуждение результатов 127
Выводы 141
Список сокращений 142
Список литературы 143
