Оглавление
ВВЕДЕНИЕ ............................................................................................................. 6
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................... 15
1.1. Ботаническое описание аралии сердцевидной (Aralia cordata
Thunb.) ................................................................................................................ 15
1.2. Химические компоненты аралии сердцевидной ................................ 16
1.2.1. Монотерпеноиды, сесквитерпеноиды и их производные ........... 17
1.2.2. Дитерпеноиды ...................................................................................... 21
1.2.3. Тритерпеноиды .................................................................................... 30
1.2.4. Другие группы биологически активных соединений .................. 33
1.3. Биологическая активность аралии сердцевидной ............................. 34
1.4. Культуры клеток Aralia ssp: получение, культивирование,
химический состав ........................................................................................... 36
1.4.1. Работы по in vitro культивированию аралии высокой (Aralia
elata Rupr. et Maxim.) .................................................................................... 36
1.4.2. Изучение культур in vitro аралии сердцевидной (Aralia cordata
Thunb.) ............................................................................................................. 38
1.4.3. Использование клеточных технологий для введения в культуру
других видов рода Aralia .............................................................................. 40
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ........................ 41
2.1. Материалы исследования ........................................................................ 41
2.2. Методы получения и условия культивирования каллусной
культуры ............................................................................................................ 41
2.2.1 Получение каллусной культуры и выбор оптимальной среды
для культивирования ................................................................................... 41
3
2.2.2. Модификация питательной среды Линсмайера-Скуга .............. 46
2.3. Методы определения ростовых характеристик каллусной культуры аралии сердцевидной ....................................................................................... 47
2.4. Методы определения морфологических характеристик и жизнеспособности каллусов ........................................................................... 48
2.4.1. Определение макроскопических признаков полученных каллусов .......................................................................................................... 48
2.4.2. Изучение микроскопических признаков каллусных культур и определение их жизнеспособности ............................................................ 48
2.5. Методы фитохимического анализа каллусных культур аралии сердцевидной ..................................................................................................... 48
2.5.1. Предварительный фитохимический анализ состава каллусных культур ............................................................................................................ 48
2.5.2. Фитохимический анализ каллусных культур с использованием физико-химических методов ....................................................................... 50
2.6. Методы определения экспрессии гена β-амиринсинтазы в каллусных культурах аралии сердцевидной и листьях интактного растения ............................................................................................................. 53
2.6.1. Выделение РНК ................................................................................... 53
2.6.2. Получение кДНК ................................................................................. 55
2.6.3. Анализ экспрессии гена β-амиринсинтазы методом ПЦР real-time ................................................................................................................... 58
2.7. Методы оценки влияния экстракта из каллусных культур аралии сердцевидной на работоспобность на моделях in vivo ............................... 59
2.7.1. Получение сухого экстракта аралии сердцевидной ..................... 59
4
2.7.2. Определение острой токсичности экстракта из каллусной культуры аралии сердцевидной на моделях in vivo ............................... 60
2.7.3. Оценка актопротекторной активности экстракта каллусной культуры аралии сердцевидной ................................................................. 61
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ................................................. 63
3.1. Изучение структурных характеристик первичного каллуса аралии сердцевидной ..................................................................................................... 63
3.1.1. Макроскопические признаки первичного каллуса ..................... 63
3.1.2. Микроскопические признаки первичного каллуса ..................... 63
3.2. Изучение структурных особенностей вторичных каллусов аралии сердцевидной ..................................................................................................... 64
3.2.1. Макроскопические признаки каллусов ......................................... 64
3.2.2. Микроскопические признаки вторичных каллусных культур на питательной среде Линсмайера-Скуга без использования добавок ... 67
3.2.3. Определение жизнеспособности каллусных культур .................. 69
3.2.4. Анализ ростовых характеристик каллусных культур ................ 70
3.3. Результаты фитохимического анализа каллусных культур аралии сердцевидной ..................................................................................................... 74
3.3.1. Результаты предварительного фитохимического анализа ......... 74
3.3.2. Результаты фитохимического изучения каллусных культур с использованием физико-химических методов анализа......................... 75
3.3.3. Результаты анализа экспрессии гена β-амиринсинтазы в каллусных культурах и листьях аралии сердцевидной ...................... 103
3.3.4. Обоснование выбора культуры для изучения актопротекторной активности на моделях in vivo .................................................................. 105
5
3.3.5. Результаты определения актопротекторной активности экстракта из каллусных культур на моделях in vivo ............................ 107
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................. 110
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................ 112
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .............................................................................. 128
ПРИЛОЖЕНИЕ ................................................................................................. 130
Приложение 1. Паспорт каллусной культуры аралии сердцевидной . 130
