Введение
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 12
1.1 Галактозидаза и источники ее получения 12
1.2 Механизм действия галактозидазы 15
1.3 Свойства галактозидаз из различных источников 21
1.4 Выделение и очистка галактозидаз 28
1.5 Применение препаратов галактозидазы 34
1.6 Анализ обзора литературы и задачи исследований 46
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 48
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 48
2.1 Методы выделения и очистки фермента 48
2.2 Методы определения ферментативной активности 52
2.3 Методы химических анализов 54
2.4 Методы определения степени чистоты препарата 55
2.5 Определение молекулярной массы 55
2.6 Определение изоэлектрической точки 56
2.7 Определение оптимальных условий действия и стабильности фермента 57
2.8 Определение влияния различных реагентов на активность Р-галактозидазы 57
2.9 Определение кинетических констант гидролиза субстратов 57
2.10 Определение специфической активности р-галактозидазы 58
2.11 Определение микробиологической чистоты препарата 59
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 60
3.1 Исследование ферментативного комплекса исходного препарата Лактоканесцин 60
3.2 Выделение и очистка Р-галактозидазы из исходного комплексного препарата 62
3.2.1 Изучение стабильности р-галактозидазы в водном растворе 63
3.2.2 Разработка способа очистки Р-галактозидазы методом ультра фильтрации 65
3.2.3 Очистка концентрата от микрофлоры методом микрофильтрации . 74
3.2.4 Разработка способа очистки Р-галактоидазы от протеиназы 75
3.3 Технологическая схема получения лекарственной субстанции (препарата Галактозим) и ее апробация 80
3.4 Разработка способа получения высокоочищенной Р-галактозидазы (фермент-стандарта) 88
3.4.1 Выбор условий предварительной очистки фермента 89
3.4.2 Выбор оптимальных условий хроматографического процесса 91
3.4.3 Обессоливание и концентрирование элюата 93
3.4.4 Исследование способов разделения а- и Р-галактозидаз 94
3.5 Определение степени чистоты препаратов Р-галактозидазы 97
3.6 Изучение физико-химических и каталитических свойств Р-галактозидазы 97
3.6.1 Влияние рН среды на активность фермента 99
3.6.2 Влияние температуры на активность р-галактозидазы ЮЗ
3.6.3 Влияние ионов металлов и специфичесих реагентов на активность Р-галактозидазы 103
3.6.4 Оределение молекулярной массы 108
3.6.5 Определение изоэлектрической точки 110
3.6.6 Определение кинетических характеристик Р-галактозидазы 111
3.6.6.1 Определение константы Михаэлиса 111
3.6.6.2 Определение характера ингибирования и константы ингибиро-вания (3-галактозидазы продуктами гидролиза 112
3.7 Изучение специфического действия Р-галактозидазы 119
3.7.1 Изучение динамики гидролиза лактозы в молочных продуктах препаратом Галактозим 119
3.7.2 Разработка готовой лекарственной формы препарата Галактозим и
изучение его эффективности в условиях, имитирующих среду организма 125
3.7.2.1 Изучение некоторых фармакологических свойств готовой лекарственной формы препарата Галактозим 126
3.7.2.2 Сравнение эффективности действия препаратов Галактозим и Лактраза на лактозу молочных продуктов 127
ВЫВОДЫ 130
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 132
ПРИЛОЖЕНИЯ 156
