Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Опухолевый ангиогенез и инвазия: общие механизмы регуляции 9
1.2. Краткая история развития представлений об ангиогенезе 14
1.3. Эндостатин: физико-химические свойства, происхождение... 16
1.3.1. Коллаген ХVIII 16
1.3.2. Изоформы коллагена XVIII 19
1.3.3. Структурная организация молекулы эндостатина 23
1.3.4. Образование Р-структур 25
1.4. Механизм действия и физиологические функции эндостатина 28
1.4.1. Протеолитические пути получения эндостатина 34
1.4.2. Рецепторы эндостатина 39
1.4.3. Свойства пептидных фрагментов эндостатина 42
1.5. Перспективы клинического применения эндостатина 42
1.5.1. Общие подходы к антиангиогенной терапии 42
1.5.2. Перспективы терапевтического использования рекомбинантного человеческого эндостатина 45
Глава 2. Материалы и методы 49
2.1. Реактивы 49
2.2. Клеточные линии 49
2.3. Конструирование экспрессионного вектора эндостатина человека 49
2.4. Наращивание биомассы штамма-продуцента Е. coli 50
2.5. Получение растворимого рекомбинантного эндостатина из штамма-продуцента . coli 50
2.6. Получение липосомной формы эндостатина 51
2.7. Получение наночастиц и определение их размеров 52
2.8. Методика культивирования клеток для проведения исследований на покоящемся и пролиферирующем эндотелии 52
2.9. Определение ЦТА эндостатина в отношении культур клеток MCF-7, DU145, АВАЕ, SVEC4-10, bSMC и фибробластов человека 53
2.10. Определение ЦТА эндостатина в отношении клеток линии HUVEC 53
2.11. Оценка выживаемости клеток 53
2.12. Исследование противоопухолевой активности препаратов рекомбинантного эндостатина in vivo 54
2.13. Статистическая обработка результатов 55
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 56
3.1. Конструирование экспрессионного вектора и биосинтез рекомбинантного эндостатина человека в клетках штамма-продуцента Escherichia coli JM 109 56
3.2. Получение растворимого рекомбинантного эндостатина из Е. coli 58
3.2.1. Получение телец включения 59
3.2.2. Солюбилизация телец включения 60
3.2.3. Ренатурация эндостатина 61
3.2.4. Гель-фильтрация 62
3.3. Цитотоксическая активность рекомбинантного эндостатина в отношении эндотелиальных клеток линий HUVEC, АВАЕ и SVEC4-10 63
3.4. Цитотоксическая активность рекомбинантного эндостатина в отношении гладкомышечных, соединительнотканных и раковых клеточных линий 66
3.5. Получение наночастиц, содержащих рекомбинантный эндостатин, и исследование их терапевтического противоопухолевого потенциала в модельных экспериментах in vivo 68
3.6. Получение липосомной формы рекомбинантного эндостатина и исследование ее антиангиогенной противоопухолевой активности in vivo 71
3.7. Исследование возможности применения липосомной формы рекомбинантного эндостатина в схемах противоопухолевой комбинированной терапии 74
Выводы 77
Список цитированной литературы 78
