Введение
Глава 1. Обзор литературы 31
1.1. Эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации...31
1. 2. Современные методы диагностики туберкулеза 33
1.2.1. Современные методы иммунодиагностики туберкулеза 36
1. 2. 1. 1. Туберкулинодиагностика 36
1.2. 1.2. Методы детекции высвобождения гамма-интерферона 37
1. 2. 1. 3. Иммуносеродиагностика 39
1.3. Особенности гуморального иммунного ответа при туберкулезе 44
1. 4. Антигены Mycobacterium tuberculosis, имеющие потенциал для серодиагностики туберкулеза з
1.4.1. Критерии отбора антигенов М. tuberculosis для целей серодиагностики туберкулеза 57
1. 4. 2. Способы получения антигенных препаратов М. tuberculosis для целей серодиагностики туберкулеза 63
1. 4. 3. Белковые антигены М. tuberculosis, обладающие потенциалом для использования в серодиагностике туберкулеза 67
1. 4. 3. 1. «RD1 белки»М tuberculosis 67
1. 4. 3. 2. Другие потенциальные белковые антигены М. tuberculosis для целей серодиагностики туберкулеза 70
1. 4. 4. Липидные и углеводные антигены М. tuberculosis 81
1. 4. 4. 1. Липоарабиноманнан (ЛАМ) 83
1. 4. 5. Конъюгаты белков М. tuberculosis с углеводными фрагментами ЛАМ...85
1. 4. 6. Мультиантигенные композиции, используемые в серодиагностике туберкулеза 86
Глава 2. Собственные исследования 90
2. 1. Получение антигенов М. tuberculosis разными методами 90
2. 1. 1. Получение рекомбинантных белков М. tuberculosis в экспрессионной системе Е. coli 90
2. 1.2. Результаты химической конъюгации рекомбинантных белков с гексаарабинофуранозидом ЛАМ 92
2. 1.3. Получение рекомбинантных белков М. tuberculosis в экспрессионной системе P. pastoris 93
2. 2. Результаты иммуноферментного анализа (ИФА) 99
2. 2. 1. Результаты ИФА с белками М. tuberculosis, экспрессированными в системе Е. coli 106
2. 2. 2. Результаты ИФА с конъюгатами белков М. tuberculosis, полученных в системе Е. coli, с синтетическим гексаарабинофуранозидом ЛАМ ПО
2. 2. 3. Результаты ИФА с белками М. tuberculosis, экспрессированными в системе P. pastoris Ill
2. 3. Сравнение диагностического потенциала рекомбинантных и синтетических антигенов М. tuberculosis 112
2. 3. 1. Сравнение показателей эффективности применения в ИФА белков М. tuberculosis, полученных в Е. coli, и их конъюгатов с гексаарабинофуранозидом ЛАМ 115
2. 3. 2. Сравнение результатов применения в ИФА аналогичных рекомбинантных белков М. tuberculosis, полученных в разных экспрессионных системах 117
2. 3. 3. Сравнение результатов применения в ИФА трех вариантов одного белка М. tuberculosis, полученного разными методами 119
2. 4. Определение расчетных показателей эффективности мультиантигенных композиций, включающих антигены М. tuberculosis, использованные в работе 120
Заключение 125
Выводы 148
Практические рекомендации 150
Перспективные направления дальнейшей разработки темы 150
Приложения 152
Приложение 1. Нуклеотидные последовательности праймеров, использованных в работе 152
Приложение 2. Основные характеристики белков М. tuberculosis, использованных в работе 153
Приложение 3. Гель - электрофореграмма образцов ДНК 154
Приложение 4. Гель - электрофореграммы белков М. tuberculosis,
использованных в работе 155 Приложение 5. Результаты иммуноблот анализа 159
Принятые обозначения и сокращения 160
Список литературы
