Введение
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13
2.1. Перевиваемые линии клеток и методы их культивирования 13
2.2. Получение суспензионных культур клеток 28
2.3. Факторы, влияющие на размножение клеток в суспензии 31
2.4. Размножение вирусов в суспензии перевиваемых линий клеток 43
2.5. Проблема контаминации клеточных культур микроорганизмами и ее профилактика
2.6 Заключение 51
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 53
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 53
3.1.1. Культуры клеток 53
3.1.2. Питательные среды, растворы и сыворотки 54
3.1.3. Вирусы 54
3.1.4. Микроорганизмы 54
3.1.5. Реактивы 55
3.1.6. Оборудование 56
3.1.7. Методы культивирования перевиваемых линий клеток 5 6
3.1.8. Методы культивирования и титрования вирусов в культуре клеток
3.1.9. Методы цитоморфологического и кариологического анализа 59
3.1.10. Методы бактериологического контроля б 0
3.1.11. Статистические методы 60
3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 61
3.2.1. Получение суспензионной перевиваемой линии клеток теcтикул поросенка
3.2.1.1. Характеристика и оценка банка перевиваемой линии клеток тестикул поросенка музея клеточных культур ГНУ ВНИИВ- 61 ВиМ
3.2.1.2. Трофическая адаптация отобранной популяции клеток ПТП к выращиванию в среде 0,25 % ФГМС с сывороткой крови КРС
3.2.1.3. Селекция и отбор пула перевиваемой линии клеток ПТП в условиях роллерной суспензии
3.2.1.4. Адаптация клеточной популяции ПТП/с к выращиванию суспензионным методом в лабораторных ферментерах
3.2.2. Оптимизация параметров суспензионного культивирования клеток ПТП-с/06
3.2.2.1. Изучение влияния концентрации сыворотки крови в ростовой среде и скорости перемешивания суспензии на жизнеспособ- 67 ность и рост клеток ПТП-с/06
3.2.2.2. Оптимизация посевной концентрации клеток ПТП-с/06 в суспензии
3.2.2.3. Оптимизация величины рН и аэрация среды при выращивании культуры клеток ПТП-с/06 суспензионным методом
3.2.2.4. Коррекция состава питательной среды в процессе суспензионного выращивания клеток
3.2.3. Стабилизация биологических свойств и паспортизация суспензионной культуры клеток ПТП-с/06
3.2.3.1. Пролиферативная стабильность клеток ПТП-с/06 при длительном культивировании в суспензии
2. Кариологическая стабильность клеток ПТП-с/06 при длительном культивировании в суспензии
3. Оценка биологических свойств суспензионной перевиваемой линии клеток ПТП-с/06 при культивировании в условиях ста- 82 ционарного и роллерного монослоя
4. Создание* банка суспензионной перевиваемой линии клеток ПТП-с/06 в жидком азоте и его оценка 85
1. Определение условий выращивания вирусов болезни Тешена и инфекционного гепатита собак в суспензии клеток ПТП-с/06
87
1.1. Влияние исходной концентрации клеток ПТП-с/06 на динамику накопления вируса болезни Тешена
Оценка возможности применения новых антибактериальных препаратов для профилактики контаминации при сус- 89 пензионном способе культивирования клеток
1. Определение минимальной подавляющей и минимальной бактерицидной концентраций ряда антибактериальных препаратов 90 в отношении санитарно-показательной микрофлоры
2. Определение максимально переносимой и минимальной цито-токсической концентраций ряда цефалоспориновых и фторхи- 92 нолоновых препаратов в ПЛК
3. Динамика антибактериальной активности цефтриаксона в процессе культивирования клеток ПТП-с/06
4. Оценка влияния цефтриаксона на вирусрепродуцирующие свойства и кариотип культуры клеток ПТП-с/06
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
5. ВЫВОДЫ 109
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО
7. СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 111
8. ПРИЛОЖЕНИЕ 1 141
