Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Строение митохондрий 8
1.2. Функции митохондрий 11
1.2.1. Продуцирование энергии митохондриями 11
1.2.2. Митохондрии в оогенезе и раннем эмбриогенезе 13
1.2.3. Участие митохондрий в апоптозе 15
1.3.Митохондриальньїй геном 21
1.3.1. Строение митохондриальнои ДНК 21
1.3.2. Репликация мтДНК 25
1.3.3. Транскрипция мтДНК 26
1.3.4. Регуляция биогенеза митохондрий 29
1.4. Биосинтез белков в митохондриях 32
1.5. Особенности генетики митохондрий 35
1.6. Митохондриальные заболевания 38
1.7. Современные представления об изучении и терапии митохондриальных болезней 48
2. Методы и материалы 56
2.1. Выделение фракции митохондрий человека из культуры клеток HepG2 и анализ функциональной активности 56
2.2. Подготовка животных 57
2.2.1. Гормональная стимуляция самок и суперовуляция 57
2.2.2. Техника стерилизации самцов 57
2.2.3. Подготовка псевдобеременных самок 57
2.3. Манипуляции с эмбрионами 58
2.3.1. Получение оплодотворенных яйцеклеток лабораторных животных (мышей) для цитоплазматической микроинъекции 58
2.3.2. Цитоплазматическая микроинъекция митохондриальнои фракции человека в оплодотворенные яйцеклетки лабораторных мышей 58
2.3.3. Культивирование доимплантационных зародышей in vitro 59
2.3.4. Разделение на бластомеры культивируемых in vitro зародышей 2-х и 4-х клеточной стадии развития 59
2.3.5. Трансплантация зигот самкам-реципиентам 61
2.4. Выделение ДНК 61
2.4.1. Выделение ДНК из зародышей 7ого-10ого дня внутриутробного развития 61
2.4.2. Выделение ДНК из зародышей 11ого и ІЗого дня внутриутробного развития и новорожденных мышей 62
2.4.3. Выделение ДНК для контроля 63
2.5. ПЦР-анализ 63
2.5.1. Разработка видоспецифичных праймеров к мтДНК человека и мыши 63
2.5.2. Анализ ДНК зародышей доимплантационных сроков развития 64
2.5.3. Анализ ДНК постимплантационных зародышей и новорожденных мышей 65
2.6. Электрофорез ДНК в полиакриламидном геле (ПААГ) 65
3. Результаты 67
4. Обсуждение результатов 82
5. Выводы 92
Список литературы 93
