Введение
1. Общие свойства эритроцитов. Деформируемость - важнейшая функциональная характеристика эритроцитов. Параметры эритроцитов, определяющие их деформируемость. Зависимость этих параметров от концентрации внутриклеточного ионизированного кальция 9
2. Основные методы количественной оценки деформируемости эритроцитов и возможность их применения для оценки популяционных характеристик эритроцитов в крови 18
2.1 Ротационная вискозиметрия 18
2.2 Эктацитометрия:БОКСЛ, осмоскан, еоскоп 20
2.3 Фильтрационные методы 23
2.4 Микропипеточный метод 30
2.5 Измерение скорости движения эритроцитов по силиконовым микроканалам 31
3. Гетерогенность популяции эритроцитов в крови. Популяционные характеристики эритроцитов в норме. Корреляционные связи между параметрами эритроцитов 31
4. Физиологическое старение эритроцитов. Изменение основных параметров и реологических свойств эритроцитов при старении in vivo. Роль внутриклеточного ионизированного кальция 37
5. Влияние некоторых факторов на стационарный уровень нутриклеточного ионизированного кальция, на активность Гардос-каналов и деформируемость эритроцитов. 44
5.1 Увеличение проницаемости мембраны эритроцита для кальция од действием сдвигового напряжения 44
5.2 Увеличение проницаемости мембраны эритроцита для кальция и нгибирование кальциевого насоса под действием окислителей. 46
5.3 Факторы, влияющие на стационарный уровень внутриклеточного ионизированного кальция и реологические свойства эритроцитов in vivo 47
6. Изменение реологических свойств и популяционных характеристик ритроцитов в крови при некоторых патологических состояниях и повреждающих воздействиях. 49
6.1. Гемолитические анемии. 50
6.1.1. Наследственный сфероцитоз и эллиптоцитоз. 50
6.1.2. Наследственная еысоко-фосфатидилхолиновая гемолитическая анемия, наследственный ксероцитоз, наследственный стоматоцитоз. 51
6.1.3. Аутоиммунная гемолитическая анемия. 52
6.1.4. Серповидноклеточная анемия. 52
6.2. Гипертензия и мозговые нарушения. 54
6.3. Травмы, инфекции, сепсис и воспаление. 55
6.4 Хроническая почечная недостаточность (ХПН). 56
6.5. Механическая травма эритроцитов. 58
6.6. Консервированныеритроциты. 59
6.7. Заключение. 61
3 Материалы и методы.
1 Приготовление суспензий эритроцитов. 65
2 Модификация эритроцитов с помощью различных воздействий.
2.1. Обработка эритроцитов глутаровым альдегидом. 66
2.2. Загрузка эритроцитов кальцием с помощью ионофора А23187. 66
2.2.1. Загрузка кальцием эритроцитов, ресуспендированных в HEPES-буфере 66
2.2.2. Загрузка кальцием эритроцитов, ресуспендированных в плазме. 66
2.3. Загрузка эритроцитов кальцием с помощью ортованадата. 66
2.4. Загрузка эритроцитов кальцием с помощью истощения
3. Измерение распределения эритроцитов по лотности. 67
4.Оценка везикуляции эритроцитов. 67
5.Фракционирование эритроцитов по плотности. 68
6. Фильтрационные измерения. 69
6.1. Фильтрометр ИДА-01 69
6.2. Кинетический фильтрометр ИДА-03. 71
6.3. Фильтры 75
7. Исследование консервированных и криоконсервированных эритроцитов 77
8. Гематологические показатели. 78
9. Статистическая обработка результатов. 78
4 Результаты
1. Разработка фильтрационно-осмотических методов (ФИОМ). 78
1.1. Зависимость скорости прохождения эритроцита через узкую пору от его геометрических и механических параметров. атематическая модель Ml 78
1.2 Фильтрометр ИДА-01. Индекс фильтруемости; его зависимость от осмотичности среды. 86
1.3 Определение зависимости процентного содержания нефильтрующихся клеток в суспензиях эритроцитов от осмотичности среды (распределение эритроцитов по исг.) с помощью фильтрометра ИДА-01. Метод последовательного отмывания фильтра 90
1.4 Определение зависимости процентного содержания нефильтрующихся клеток в суспензиях эритроцитов от осмотичности среды (распределение эритроцитов по ис„) с помощью фильтрометра ИДА-01. Метод двух гематокритов 93
1.5 Кинетический фильтрометр ИДА-03. Обработка экспериментальных данных. 96
2. Распределение эритроцитов в крови здоровых доноров по плотности и критической осмотичности (по фильтруемости) 101
2. Характер распределения по критической осмотичности в эритроцитах разного возраста. Поддержание постоянного отношения поверхность/объем в процессе старения эритроцитов. 106
3. Распределение эритроцитов по плотности и ритической осмотичности при некоторых воздействиях in itro. 114
4.1. Зависимость распределения нормальных эритроцитов по плотности и критической осмотичности отрН среды. 114
4.2. Зависимость распределения нормальных эритроцитов по плотности и критической осмотичности от температуры. 116
4.3. Изменение распределений эритроцитов по плотности при инкубации с мфотерицином В Определение зависимости процентного содержания нефильтрующихся клеток в суспензиях эритроцитов от осмотичности среды (распределение эритроцитов по исг.) с помощью фильтрометра ИДА-01.. 119
4.4. Уширение распределений эритроцитов по плотности и фильтруемости под действием факторов, повышающих уровень нутриклеточного кальция. 120
4.4.1. Изменение распределений эритроцитов по плотности и фильтруемости при загрузке их кальцием с помощью ионофора А23187. 120
4.4.2. Изменение распределений эритроцитов по плотности и фильтруемости при загрузке их кальцием с помощью ортованадата. 124
4.4.3. Изменение распределений эритроцитов по плотности и фильтруемости при загрузке их кальцием с помощью истощения клеток по АТФ. 127
5. Распределение эритроцитов по плотности и ритической осмотичности при консервировании и криоконсервировании. 129
5.1. Распределение по плотности и критической осмотичности эритроцитов, консервированных при положительных емпературах. 129
5.2. Распределение по плотности и критической осмотичности риоконсервированных эритроцитов. Прогнозирование эффективности трансфузий криоконсервированных эритроцитов 133
6. Распределение эритроцитов по плотности и критической смотичности при некоторых патологических состояниях. 137
6.1. Наследственный сфероцитоз 137
6.2. Аутоиммунная гемолитическая анемия 141
5 Заключение 149
Выводы 160
