Введение
ГЛАВА I Обзор литературы 15
1.1. Клетки, применяемые для клеточной терапии .15
1.2. Костный мозг как источник материала для клеточной терапии .16
1.2.1. Гемопоэтические клетки костного мозга 16
1.2.2. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки костного мозга 19
1.3. Селезенка – основное депо зрелых лимфоидных клеток костномозгового происхождения 21
1.4. Миграционная активность клеток .22
1.4.1. Миграционная ось SDF-1/CXCR4 22
1.4.2. Миграционная ось VLA4/VCAM-1 23
1.4.3. Миграционная ось SCF\cKit 23
1.4.4. Миграционная ось VEGF/VEGFR .24
1.4.5. Миграционная ось HGF/c-Met 24
1.4.6. Миграционная ось MCP-1/CCR2 .25
1.5. Ниша стволовой клетки как регулятор миграции 26
1.6. Методы изучения миграции и распределения трансплантированных клеток 27
1.7. Особенности миграции и распределения гемопоэтических клеток костного мозга различной степени дифференцировки .30
1.8. Факторы, влияющие на миграцию и
распределение трансплантированных клеток .33
1.9. Трансплантация клеток при опухолевом росте .36
1.9.1. Влияние трансплантированных клеток на рост и метастазирование опухоли .36
1.9.2. Миграция и распределение трансплантированных клеток при опухолевом росте .39
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования .41
2.1. Лабораторные животные 41
2.2. Выделение клеток для трансплантации, их культивирование и характеристика .41
2.2.1. Индукция адипогенной дифференцировки ММСК 42
2.2.2. Индукция остеогенной дифференцировки ММСК. 43
2.2.3. Определение фенотипа ММСК костного мозга. 43
2.2.4. Окрашивание клеток витальным красителем Hoechst 33342 43
2.3. Выделение ДНК из органов реципиента и определение ее концентрации 44
2.4. Исследование миграции и распределения трансплантированных клеток .44
2.4.1 Изучение миграции и распределения трансплантированных клеток костного мозга и селезенки 44
2.4.2. Изучение миграции и распределения трансплантированных клеток нефракционированного костного мозга и ММСК .46
2.5. Исследование влияния роста опухоли на миграцию и распределение трансплантированных клеток костного мозга 27
2.6. Изучение влияния трансплантации клеток костного мозга на выживаемость животных-носителей меланомы В16 47
2.7. Оценка влияния трансплантации клеток на опухолевый рост 48
2.8 Флуоресцентная микроскопия срезов органов 48
2.9. Разработка микрочиповой методики анализа
распределения трансплантированных клеток 49
2.10. Статистическая обработка полученных результатов 50
ГЛАВА III. Результаты исследования .51
3.1. Динамика распределения трансплантированных клеток костного мозга и спленоцитов по органам интактного реципиента 51
3.1.1. Распределение трансплантированных клеток костного мозга...51
3.1.2. Распределение трансплантированных клеток селезенки 54
3.1.3. Сравнительный анализ временной динамики распределения трансплантированных клеток костного мозга и селезенки .56
3.2. Влияние меланомы В16 на миграционную активность неразделенной популяции клеток костного мозга и ММСК 61
3.2.1. Распределение трансплантированных клеток костного мозга по органам интактного реципиента 61
3.2.2. Распределение трансплантированных клеток костного мозга в организме реципиента-носителя меланомы В16 64
3.2.3. Сравнительный анализ распределения трансплантированных клеток костного мозга в организме интактного реципиента и реципиента-носителя меланомы В16 68
3.2.4. Влияние опухолевого роста на распределение трансплантированных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга 72
3.2.5. Распределение нефракционированной популяции клеток костного мозга и мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток в организме реципиента-носителя меланомы В16 .74
3.3. Изучение распределения трансплантированных клеток в органах реципиента-носителя меланомы в при помощи флуоресцентной микроскопии 76
3.4. Анализ влияния трансплантации ККМ на выживаемость животных-носителей меланомы В16 и рост опухоли 84
3.5. Разработка биочипа для оценки миграционной активности изучаемых клеток 86
3.5.1. Количественная нормировка контрольного олигонуклеотида (Q4) 87
3.5.2. Модельный микрочиповый анализ специфической последовательности Y-хромосомы разной концентрации, иммобилизованной на аминослайды с нормиров кой по внешнему стандарту 88
3.6. Сравнительная оценка результатов, полученных при использовании ПЦР, ПЦР в режиме реального времени и биочипового анализа 90
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов исследования 92
Заключение 103
Выводы 105
Список сокращений .106
Список литературы
