Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Клинические и фундаментальные медико-биологические предпосылки трансплантации ретинального пигментного эпителия 13
1.2. Трансплантация ретинального пигментного эпителия 19
1.2.1. Клинический опыт 19
1.2.2. Современные экспериментальные тенденции 25
1.3. Многоклеточные сфероидные микроагрегаты
(сфероиды) как форма трансплантата 27
ГЛАВА 2. Материалы и методы экспериментальных исследований 32
2.1. Первый этап. Выделение клеток ретинального пигментного эпителия донора-трупа для трансплантации 33
2.1.1. Характеристика использованного донорского материала 34
2.1.2. Выделение ретинального пигментного эпителия 37
2.2. Второй этап. Подготовка ретинального пигментного эпителия к трансплантации методом трехмерного клеточного культивирования 38
2.2.1. Первичное 2D культивирование ретинального пигментного эпителия 39
2.2.2. Клеточное 2D субкультивирование ретинального пигментного эпителия 41
2.2.3. Трехмерное клеточное культивирование 43
2.3. Третий этап. Разработка критериев трансплантабельности сфероидов ретинального пигментного эпителия 44
2.4. Четвертый этап. Изучение процесса реконструкции клеточного слоя при помощи сфероидов ретинального пигментного эпителия in vitro
2.5. Пятый этап. Изучение адгезивных свойств сфероидов ретинального пигментного эпителия в условиях органной культуры хороидально пигментного комплекса in vitro 47
2.5.1. Органная культура хороидально-пигментного комплекса 48
2.5.2. Формирование сфероидов ретинального пигментного эпителия 49
2.5.3. Морфологическое исследование 49
2.6. Лабораторные материалы и методы исследования 50
2.6.1. Нормотермическое культивирование 50
2.6.2. Криоконсервация/дефростация 51
2.6.3. Оценка жизнеспособности клеток 52
2.6.4. Перечень использованного лаборораторного оборудования, расходных материалов и хирургических инструментов 52
2.7. Получение и обработка количественных данных 57
ГЛАВА 3. Результаты экспериментальных исследований 60
3.1. Результаты разработки техники выделения клеток ретинального пигментного эпителия из трупных донорских глаз человека для трансплантации 60
3.1.1. Принципы первичного отбора глазных яблок для выделения ретинального пигментного эпителия 60
3.1.2. Разработка оригинальной методики выделения клеток ретинального пигментного эпителия 63
3.1.3. Оценка чистоты получаемой суспензии клеток ретинального пигментного эпителия 64
3.1.4. Оценка целостности иридо-хрусталиково-цилио-витрео-ретинального комплекса 66
3.1.5. Оценка жизнеспособности выделенного клеточного материала 69
3.2. Результаты разработки техники подготовки
ретинального пигментного эпителия к
субретинальной трансплантации методом
трехмерного клеточного культивирования 71
3.2.1. Характеристика двухмерных культур пигментного эпителия 72
3.2.2. Разработка техники подготовки ретинального пигментного эпителия к трансплантации методом трехмерного клеточного культивирования 78
3.2.3. Формирование сфероидов ретинального пигментного эпителия методом трехмерного клеточного культивирования 81
3.2.4. Иммуноцитохимическое исследование получаемых сфероидов РПЭ 88
3.3. Результаты разработки критериев оценки трансплантабельности сфероидов ретинального пигментного эпителия 93
3.3.1. Результаты оценки жизнеспособности клеток ретинального пигментного эпителия в составе сфероидов 93
3.3.2. Результаты изучения адгезивных свойств сфероидов с различными параметрами 97
3.4. Результаты изучения процесса реконструкции слоя ретинального пигментного эпителия in vitro при помощи многоклеточных сфероидных микроагрегатов ретинального пигментного эпителия 103
3.4.1. Качественные феномены, наблюдаемые при реконструкции слоя ретинального пигментного эпителия in vitro 103
3.4.2. Изменение площади слоя ретинального пигмнтного эпителия in vitro 107
3.5. Результаты изучения адгезивных свойств сфероидов ретинального пигментного эпителия в условиях органной культуры хороидально пигментного комплекса 111
3.5.1. Формирование органной культуры хороидально-пигментного комплекса донора-трупа в оригинальной модификации 111
3.5.2. Результаты сокультивирования сфероидов ретинального пигментного эпителия в органной культуре хороидально-пигментного комплекса 116
Заключение 126
Выводы 136
Практические рекомендации 137
Список условных сокращений 138
Библиография
