СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................................4
ВВЕДЕНИЕ...............................................................................................................................5
1. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.............................................................................. 11
Е1 Наночастицы оксидов железа - материалы с уникальными свойствами..........11
1.2 Клеточная смерть, её формы и типы.........................................................................18
1.3 . Взаимосвязь форм регулируемой клеточной смерти..........................................39
1.4 Механизмы индукции клеточной смерти наночастицами оксидов железа
(НЧОЖ)...................................................................................................................................41
2. ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ....................................... 48
2.1 Объекты исследований................................................................................................ 48
2.1.1 Клеточные культуры................................................................................................. 48
2.1.2 Характеристика наночастиц, использованных в исследовании......................48
2.2 Методы исследований.................................................................................................50
2.2.1 Культивирование клеточных культур................................................................... 50
2.2.2 Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови человека.. 52
2.2.3 Анализ цитотоксичности с использованием красителя WST-1.....................53
2.2.4 Анализ цитотоксичности с использованием красителя alamarBlue.............. 55
2.2.5 Культивирование клеток в присутствии НЧМ и внешних источников
постоянного магнитного поля............................................................................................ 57
2.2.6 Анализ клеточной жизнеспособности и исследование образования АФК
методом проточной цитометрии........................................................................................ 59
2.2.7 Анализ апоптотических изменений в клетках....................................................60
2.2.8 Анализ активности каспазы-3.................................................................................63
2.2.9 Исследование морфологии митохондрий............................................................ 64
3
2.2.10 Исследование процессов деполяризации митохондриальных мембран...64
2.2.11 Вестерн-блот.............................................................................................................65
2.2.12 Исследование уровня экспрессии гена LC3 методом ПЦР в реальном времени....................................................................................................................................68
2.2.13 Анализ состояния лизосом....................................................................................69
3. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ...........................................................70
3.1 Воздействие НЧМ на жизнеспособность клеток Jurkat и МИК........................70
3.2 Влияние формы наночастиц на характер клеточного ответа.............................77
3.2.1. Воздействие НК и НКЛ вызывает эффект острой гепатотоксичности.......77
3.2.2.
Воздействие НК активирует процессы аутофагического потока в клеточных
линиях Huh7 и Alexander.....................................................................................................84
3.2.3
НК и НКЛ индуцируют прогрессивную пермеабилизацию лизосомальных
мембран...................................................................................................................................90
4. ВЫВОДЫ..........................................................................................................................97
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..............................................................................................98
