Введение
ГЛАВА 1. Современное состояние проблемы индивидуализации лекарственной терапии злокачественных опухолей (обзор литературы) 18
1.1. Проблемы современной противоопухолевой терапии 18
1.2. Молекулярно-биологические маркеры, как прогностические факторы токсичности и эффективности противоопухолевого лечения 27
1.2.1.Молекулярно-биологические маркеры токсичности противоопухолевой терапии 28
1.2.2.Молекулярно-биологические маркеры эффективности противоопухолевой терапии 30
Статус гормональных рецепторов при раке молочной железы (РМЖ) 31
Рецептор эпидермального фактора роста (Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR) HER-2/neu 31
Мутации гена EGFR, как маркеры эффективности ингибиторов тирозинкиназ (гефитиниба, эрлотиниба) 34
Экспрессия C-kit, PDFGR-a, PDFGR-P, как маркеров эффективности ингибиторов тирозинкиназы С (иматиниба, сунитиниба) 38
K-RAS, как предиктивный маркер эффективности ингибиторов EGFR
(цетуксимаба, панитумумаба) 42
Сосудисто-эндотелиальный фактор роста (VEGF) и ингибиторы ангиогенеза 43
Молекулярные маркеры эффективности фторпиримидинов 44
ERCC1, как маркер чувствительности опухоли к препаратам платины 47
В-Тубулин, как маркер эффективности таксанов 50 BRCAl, как маркер эффективности цитостатиков, повреждающих ДНК
(препаратов платины, антрациклиновых антибиотиков) 52
Топоизомераза 2-альфа (ТОР2А) - молекулярная мишень для антрациклиновых антибиотиков 53
Циклооксигеназа 2 (СОХ2), как маркер эффективности ингибиторов циклооксигеназы 55
Антиген mucl, как маркер эффективности моноклонального антитела (имутерана) 55
1.3. Фармакоэкономический анализ индивидуализации лекарственной терапии на основании молекулярных маркеров 56
1.4. Заключение 61
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 63
2.1. Исследуемая популяция больных по определению уровня экспрессии
генов DPD, TS, ТР, ERCC1, р-тубулина, СОХ2, muc-1, C-kit, VEGF, PDGFR a, PDGFR-p, BRCAl, TOP2A, мутации EGFR, k-ras, BRCAl, амплификации Her-2/neu, TOP2A в опухолевой ткани 63
2.1.1. Клиническая характеристика больных НМРЛ, обследованных на наличие мутации гена EGFR 65
2.1.2. Основная клиническая характеристика больных НМРЛ, включенных в исследование частоты экспрессии ERCC1 и ріП-тубулина и их предиктивной значимости 66
2.1.3. Характеристика больных диссеминированным раком желудка, включенных в анализ молекулярных маркеров (TS, ТР, DPD, ERCC1, BRCA, ТОР2) 70
2.1.4. Характеристика больных колоректальным раком, включенных в исследование предиктивной роли TS, ТР и DPD 72
2.2. Методы определения уровня экспрессии TS, ТР и DPD, Р-тубулина,
ERCC1, СОХ2, mucl, VEGF, EGFR, C-kit, PDFGR-a, PDFGR-P, BRCAl,
TOP2A, амплификации Her-2/neu, TOP2A, мутаций EGFR, BRCAl, k-ras в
опухолевой ткани больных с различными солидными опухолями 74 2.2.1.Методика проведения количественной ПЦР в реальном времени...75
Выделение РНК из архивных патоморфологических образцов 75
Проведение реакции обратной транскрипции 76
Выделение ДНК из парафиновых блоков 76
Изучение уровня экспрессии мРНК генов с помощью количественной ПЦР в реальном времени 77
Определение наличия/отсутствия мутации EGFR и k-ras с помощью ПЦР 79
Исследование амплификации гена ТОР2А 80
Определение мутации 5382insC гена BRCA1 81
2.2.2. Обследование больных и оценка эффективности лечения 82
2.2.3. Анализ токсичности лечения 86
2.3. Фармакоэкономический анализ лечения гефитинибом и стандартной химиотерапией при НМРЛ 86
ГЛАВА 3. Оценка уровней экспрессии молекулярно генетических маркеров у больных различными солидными опухолями 90
3.1. Чувствительность к фторпиримидинам (уровни экспрессии DPD, ТР, TS) у больных различными солидными опухолями 90
3.2. Уровень экспрессии СОХ2, как маркера чувствительности к ингибиторам циклооксигеназы 97
3.3. Определение экспрессии mucl, как маркера чувствительности к
моноклональному антителу - имутерану 98
3.4. Уровень экспрессии ERCC1, как маркера чувствительности опухолей
различных локализаций к препаратам платины 100
3.5. Уровень экспрессии VEGF у больных различными солидными опухолями 101
3.6. Уровень экспрессии C-kit, PDGFR-a, PDGFR-p\ как маркеров чувствительности к ингибиторам тирозинкиназы 103
3.7. Уровень экспрессии b-тубулина III типа, как маркера чувствительности к препаратам таксанового ряда 106
3.8. Частота мутации гена EGFR, как маркера эффективности тирозинкиназных ингибиторов (гефитиниба и эрлотиниба) 107
3.9. Определение частоты амплификации Her-2/neu у больных опухолями различных локализаций 108
3.10. Частота мутации k-ras, как маркера резистентности к ингибиторам EGFR (цетуксимабу, панитумумабу) 109
3.11. Частота экспрессии молекулярно-генетических маркеров чувствительности к лекарственной терапии у больных опухолями различных локализаций 110
ГЛАВА 4. Молекулярно-генетические особенности немелкоклеточного рака легкого и их значение для определения эффективной лекарственной терапии 113
4.1. Частота мутаций в гене EGFR у больных НМРЛ 113
4.2. Эффективность гефитиниба у больных неоперабельным НМРЛ с наличием мутации в гене EGFR 115
4.3. Токсичность гефитиниба у больных НМРЛ с мутацией гена EGFR 120
4.4. Алгоритм обследования и лечения больных неоперабельным неплоскоклеточным НМРЛ
ГЛАВА 5. Предиктивное значение ercc1 и ВШ-тубулина у больных немелкоклеточным раком легкого 126
5.1. Исследование частоты экспрессии ERCC1 и рііі-тубулина в опухолевой ткани больных НМРЛ 126
5.2. Оценка влияния внутриопухолевой экспрессии ERCC1 и ріП-тубулина на эффективность химиотерапии у больных НМРЛ 127
ГЛАВА 6. Индивидуализация лекарственного лечения больных колоректальным раком препаратами фторпиримидинового ряда 136
6.1. Влияние молекулярно-биологических маркеров опухоли (TS, ТР, DPD)
на эффективность лекарственной терапии больных метастатическим
колоректальным раком 136
6.1.1. Тимидилат синтетаза (TS) 137
6.1.2. Тимидин фосфорилаза (ТР) 140
6.1.3. Дигидропиримидин дегидрогеназа (DPD) 142
6.1.4. Комбинации различных уровней экспрессии TS, ТР и DPD 145
ГЛАВА 7. Индивидуализация лекарственного лечения больных раком желудка на основе молекулярно генетических маркеров 155
7.1. Анализ экспрессии генов TS, DPD, ERCC1, BRCA1 и ТОР2А у больных диссеминированным раком желудка 155
7.2. Анализ частоты мутаций гена BRCA1 у больных диссеминированным раком желудка 158
7.3. Анализ влияния экспрессии маркеров TS, DPD, ERCC1, BRCA1 и ТОР2А на эффективность химиотерапии больных диссеминированным раком желудка 159
7.4. Анализ амплификации гена ТОР2А 167
7.5. Алгоритм выбора терапии первой линии больных диссеминированным раком желудка на основании анализа молекулярных маркеров 168
ГЛАВА 8. Фармакоэкономический анализ терапии гефитинибом больных немелкоклеточным раком легкого 172
Глава 9. Обсуждение полученных результатов 181
Выводы 209
Практические рекомендации 211
Список литературы
