Введение
Глава 1. Обзор литературы 17
1.1. Активные формы кислорода и пути их образования в организме 17
1.2. Повреждающее действие активных форм кислорода на молекулярные компоненты клетки 22
1.3. Биологическая роль активных форм кислорода 28
1.4. Антиоксидантная защита организма 38
1.5. Окислительный стресс как один из патогенетических механизмов дисфункции плаценты 45
1.6. Генетические факторы как одна из возможных причин усиления окислительного стресса при невынашивании беременности 59
1.7. Хемилюминесцентный анализ как быстрый метод регистрации процессов свободнорадикального окисления в акушерской
практике 60
Глава 2. Материал и методы 62
2.1. Получение постмитохондриальной фракции плаценты 63
2.1.1. Выделение митохондриальной фракции плаценты 64
2.1.2. Определение интенсивности процессов свободнорадикального окисления в ткани 64
2.1.3. Измерение интенсивности перекисной хемилюминесценции в сыворотке крови 65
2.1.4. Метод количественного определения диеновых конъюгатов 65
2.1.5. Опре деление вторичных продуктов ПОЛ, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-тест) 66
2.1.6. Метод определения окислительной модификации белков по уровню карбонильных производных
2.1.7. Определение содержания миелопероксидазы иммуноферментным методом 67
2.1.8. Определение активности NO-синтазы 68
2.1.9 Определение активности пероксидаз 68
2.2. Определение общей антиоксидантной активности 69
2.2.1. Определение небелковых тиоловых групп с помощью реактива Эллмана 69
2.2.2. Определение активности каталазы
2.2.3. Метод определения активности супероксиддисмутазы 70
2.2.4. Определение активности глутатионпероксидазы 71
2.2.5. Определение активности глутатионредуктазы 72
2.2.6. Определение активности глутатион-8-трансферазы 72
2.2.7. Определение показателей эндогенной интоксикации 73
2.2.8. Определение белка 74
2.2.9. Выделение ДНК 74
2.3. Постановка полимеразной цепной реакции (ПЦР) 75
2.3.1. Электрофорез в полиакриламидном геле 76
2.3.2. Идентификация полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ) 76
2.3.3. Методы статистической обработки 77
Глава 3. Результаты собственных исследований 79
3.1 Структура невынашивания беременности в анамнезе женщин основной группы и группы сравнения 81
3.2. Изучение процессов свободнорадикального окисления и уровня антиоксидантной защиты в митохондриях плацент женщин основной группы и группы сравнения 86 Стр.
3.3. Оценка интенсивности процессов свободнорадикального окисления в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения 93
3.3.1. Механизм люминолзависимой хемилюминесценции в тканях плацент женщин основной группы и группы сравнения 97
3.3.2 Изучение миелопероксидазы постмитохондриальной фракции плацент у женщин основной группы и группы сравнения на протяжении беременности 102
3.3.3 Изучение NO-синтазной активности в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения на протяжении беременности 107
3.4. Изучение антиоксидантнои системы в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения 111
3.4.1. Активность глутатионзависимой системы антиокислительной защиты в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения на протяженииб еременности 113
3.4.2. Определение показателей эндогенной интоксикации в постмитохондриальной фракции плацент женщин основной группы и группы сравнения 119
3.4.3. Значение определения активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантнои системы плаценты для прогноза риска прерывания беременности 123
3.5. Анализ показателей про- антиоксидантнои систем в плацентах женщин при преждевременных родах и беременности, осложненной гестозом, по сравнению с физиологическими показателями 128
3.6. Изучение полиморфизма генов глутатион-Б-трансфераз в плацентах женщин основной группы и группы сравнения 132 Стр.
3.6.1. Зависимость активности глутатион-8-трансферазы от вариантов генотипа по гену GST Рів плацентах женщин основной группы 139
3.6.2. Зависимость активности глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы от вариантов генотипа по гену GST Р1 в плацентах женщин основной группы
3.7. Математические модели взаимосвязи активности ферментов глутатионзависимого звена антиоксидантнои защиты системы и вариантов генотипа по гену GST Р1 плаценты у женщин 146
3.8. Использование метода хемилюминометрии для оценки риска невынашивания при угрозе прерывания беременности поздних сроков 147
Глава 4. Обсуждение 155
Заключение 180
Выводы 184
Практические рекомендации 186
Список литературы
