Введение
Список сокращений 4
Введение 5
Обзор литературы 13
Плюрипотентные клетки в предимплантационном развитии
Стадии предимплантационного развития 15
Специализация слоя трофоэктодермы (ТЭ) 17
Молекулярные факторы гетерогенности клеток 17
Разделение ТЭ и ВКМ в бластоцисте 17
Разделение эпибласта и примитивной энтодермы в составе внутренней клеточной массы Формирование полости бластоцисты.. 19
Хетчинг и имплантация зародышей 16
Линии плюрипотентных клеток 25
Характеристики эмбриональных стволовых клеток 25
Молекулярные механизмы плюрипотентности 29
Сигнальные пути ЭСК 31
Роль Wnt сигнального пути в поддержании плюрипотентности и самообновления ЭСК Е-кадгерин и клеточная адгезия в поддержании 34
Дифференцировка ЭСК 35
Начальные этапы дифференцировки, образование эмбриоидных тел (ЭТ) Эпителиально-меземхимный переход 36
Нейроэктодермальная дифференцировка ЭСК 37
Материалы и методы 41
Объекты исследования 41
Выделение зародышей 41
Расчет объема зародышей 42
Микроинъекция в полость бластоцисты 42
Осмотический шок з
Культивирование зародышей 43
Оценка жизнеспособности зародышей 44
Культивирование ЭСК мыши 44
Анализ роста ЭСК in vitro 45
Морфофункциональная оценка ЭСК 45
Определение активности ЭЩФ 45
Дифференцировка ЭСК in vitro 45
Выявление тканеспецифических маркеров 46
Анализ изображений и построение графиков 47
Микроинъекция ЭСК в полость бластоцисты 47
Статистическая обработка результатов 47
Результаты и обсуждение 49
Травматическое действие микроинъекции (МИ) 49
Морфология и выживаемость бластоцист после МИ 50
Изменение объема бластоцисты после МИ 55
Ответная реакция эмбрионов на осмотический шок 59
Эмбриональные стволовые клетки мышей линии R1 64
Характеристика клеток R1NGF in vitro 65
Дифференцировка клональных потомков R1NGF 69
Гетерогенность клеточных популяций R1NGF 71
Микроинъекция (МИ) клеток R1NGF в бластоцисту. 75
Распределение инъецированных клеток в бластоцисте 76
Влияние NGF на дифференцировку ЭСК в составе бластоцисты
Заключение 85
Выводы 90
Список литературы
