Введение
РАЗДЕЛ I. Обзор литературы 21
1.1. Проницаемость эритроцитов для неэлектролитов и парамагнитных ионов 21
1.2. Теоретический анализ проницаемости клеточных мембран для неэлектролитов 26
1.2.1. Уравнения, основанные на законе диффузии Фика 26
1.2.2. Уравнения, основанные на законах неравновесной ф термодинамики 30
1.2.3. Распределение веществ между клеткой и окружающей ее средой 34
1.3. Влияние различных физико-химических факторов на состояние цитоплазмы эритроцитов 35
1.4. Гипотезы, теории криоповреждения и криозащиты 39
1.5. Способы криоконсервирования эритроцитов 50
РАЗДЕЛ II. Материалы и методы исследования 65
2.1. Метод электронного парамагнитного резонанса 65
2.1.1. Исследование проницаемости мембран эритроцитов для криопротекторов методом ЭПР спинового зонда 69.
2.2. Исследование распределения криопротекторов между эритроцитами и внеклеточной средой методом ЯМР 86
2.3. Исследование гидратации эритроцитов методом ЭПР спинового зонда 90
2.4. Исследование времени корреляции вращательной диффузии спинового зонда во вне- и внутриклеточных средах методом ЭПР
2.5. Краткое описание строения эритроцита 98
2.6. Исследование эритроцитов методом спектрофотометрии 101
2.7. Подготовка эритроцитов для исследования 105
2.8. Получение красных теней эритроцитов 106
2.9. Подготовка реактивов 106
2.10. Замораживание эритроцитов 107
РАЗДЕЛ III. Влияние температуры и концентрации внутриклеточного белка на проницаемость эритроцитов для криопротекторов 112
3.1. Влияние температуры на проницаемость мембран эритроцитов для криопротекторов 112
3.2. Влияние концентрации внутриклеточного белка на проницаемость мембран эритроцитов для глицерина 127
3.3. Влияние концентрации внутриклеточного белка гемоглобина на распределение различных веществ между вне- и внутриклеточными средами 134
РАЗДЕЛ IV. Влияние различных физико-химических факторов на время корреляции вращательной диффузии спинового зонда вне, внутри эритроцитов и структурно-функциональное состояние гемоглобина их цитоплазмы 159
4.1. Влияние концентрации различных веществ на время корреляции вращательной диффузии зонда ТЕМПОН в цитоплазме эритроцитов 161
4.2. Влияние температуры на время корреляции вращательной диффузии зонда ТЕМПОН в цитоплазме и во внеклеточном растворе 180
4.3. Влияние различных физико-химических факторов на структурно-функциональное состояние внутриклеточного белка гемоглобина 187
РАЗДЕЛ V. Криоконсервирование эритроцитов 218
5.1. Оценка цитотоксичности криопротекторов 219
5.2. О роли переохлаждения в повреждении биообъектов на этапе замораживания 227
5.3. О роли осмотических факторов в повреждении биообъектов на этапе замораживания 237
5.4. Влияние сочетания 1,2-пропандиола с различными высокомолекулярными веществами на сохранность эритроцитов при криоконсервировании 247
Заключение 272
Выводы 281
Список использованных источников 284
