Введение
1 Обзор литературы 8
1.1. Медицинское значение трансплантации эндокринных желёз 8
1.2. Реакция отторжения трансплантата 8
1.3. Типы иммунологической толерантности 12
1.3.1. Портальная донор-специфическая толерантность (ДСТ) 13
1.4. Особый иммунологический статус печени 14
2. Протеасомы 18
2.1.1. Цилиндрин 19
2.1.2. Мультикаталитический протеазный комплекс 20
2.2. Каталитический механизм 22
2.3. Структура протеасом 27
2.3.1. Альфа-субъединицы 27
2.3.2. Бета-субъединицы и каталитические активности протеасом 27
2.3.3. Регуляторы 20S протеасомы 30
2.4. Номенклатура субъединиц протеасомы 32
2.5. Функции протеасом 35
2.5.2. Функции иммунных протеасом 36
2.5.2.1. Участие иммунных протеасом в селекции Т-лимфоцитов. 36
2.5.2.2. Иммунные протеасомы и презентация антигена. 38
2.5.2.3. Запуск иммунного ответа на уровне NFB и участие иммунных протеасом в образовании цитокинов 38
3. Возможная роль протеасом в развитии портальной толерантности. 40
2 Материалы и методы 42
1. Подготовка животных 42
2. Определение гормонов в сыворотке крови животных 43
3. Получение ультратонких срезов печени и трансплантата 43
4. Гистологическая окраска ультратонких срезов 44
5. Иммуногистохимическое окрашивание срезов 44
6. Подготовка образцов для определения активностей протеасом и иммуноблоттинга 45
7. Иммуноблоттинг 45
8. Измерение ферментативных активностей протеасом 46
9. Определение концентрации белка 47
10. Выделение мононуклеарных клеток печени, свободных от гепатоцитов 47
11. Проточная цитофлуориметрия. 48
12. Разработка нативного электрофореза протеасом 49
12.1. Подготовка гомогената 49
12.2. Удаление нуклеиновых кислот из образца 50
12.3. Проведение нативного электрофореза с последующей детекцией протеасом 51
13. Статистическая обработка данных 52
3 Результаты 53
1. Протеасомы в развитии донор-специфической толерантности 53
1.1. Иммунные протеасомы и динамика развития ДСТ в печени 53
1.2. Трансплантация яичника 57
1.3. Трансплантация щитовидной железы 64
2. Нативный электрофорез протеасом 78
2.1. Разработка метода подготовки образцов 78
2.2. Анализ структуры иммунных протеасом печени 82
4 Обсуждение 84
Динамика развития донор-специфической толерантности в печени 84
Протеасомы при трансплантации эндокринных желез после индукции донор специфической толерантности 86
Нативный электрофорез протеасом печени 90
Заключение 94
Выводы 95
Список сокращений 96
Список литературы 98
