Введение
Обзор литературы 11
1. Сериновые протеиназы 11
1.1. Характеристика и классификация субтилизиноподобных протеиназ 12
1.2. Субтилизины и субтилизиноподобные протеиназы бацилл 13
1.3. Глутамилэндопептидазы микроорганизмов - новое подсемейство химотрипсиновых протеиназ 16
2. Функциональная роль внеклеточных протеиназ микроорганизмов 19
3. Особенности биосинтеза бактериальных протеиназ 23
4. Применение протеолитических ферментов 30
5. Бактериальные альдолазы 38
Экспериментальная часть 48
Материалы и методы 48
Результаты исследования 61
1. Подходы для повышения уровня продукции бактериальных протеиназ и альдолаз 61
1.1. Оптимизация питательных сред для эффективного синтеза протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 61
1.1.1. Динамика роста, биосинтеза сериновых протеиназ и спорообразования культур B.amyloliquefaciens и B.pumilus 61
1.1.2. Влияние пептона и неорганического фосфата на продукцию протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 64
1.1.3. Влияние солей аммония на биосинтез протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 69
1.1.4. Влияние белковых субстратов и дрожжевого экстракта на биосинтез протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 71
1.1.5. Влияние аминокислот на продукцию субтилизиноподобных протеиназ B.pumilus 73
1.1.6. Влияние ионов двухвалентных металлов на продукцию субтилизиноподобных протеиназ B.pumilus 74
1.2. Получение рекомбинантных штаммов-продуцентов трансальдолазы B.subtilis и фруктозо-6-фосфат-альдолазы A129S E.coli 76
2. Выделение и очистка сериновых протеиназ и альдолаз 82
2.1. Получение гомогенных препаратов субтилизиноподобных протеиназ и глутамилэндопептидаз B.amyloliquefaciens и B.pumilus 82
2.2. Выделение и очистка трансальдолазы B.subtilisn фруктозо-6-фосфат-альдолазы A129S E.coli 85
3. Характеристика ферментов 85
3.1. Влияние ингибиторов на активность сериновых протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 85
3.2. Энзиматические свойства сериновых протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 88
3.3. Субстратная специфичность сериновых протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 96
3.4. Фибринолитическая, тромболитическая и антикоагулянтная
активность сериновых протеиназ B.amyloliquefaciens и B.pumilus 101
3.5. Способность субтилизиноподобных протеиназ B.amyloliquefaciens к ферментативному синтезу пептидных связей 103
3.6. Синтетическая активность трансальдолазы B.subtilis и фруктозо-6-фосфат-альдолазы Al 29S E.coli 106
Обсуждение результатов 111
Выводы 133
Благодарности 134
Литература 135
