Введение
1. Литературный обзор 7
1.1. Протеогликаны и фибриллярные белки как основа ВКМ 7
1.2. Структура и классификация протеогликанов 8
1.3. Функции протеогликанов 12
1.4. Участие протеогликанов в регуляции поведения клеток 14
1.4.1. Участие протеогликанов в регуляции адгезии клеток 14
1.4.2. Влияние протеогликанов на пролиферацию и дифференцировку клеток 17
1.5. Роль протеогликанов в миогенезе 20
1.6. Методы вьщеления протеогликанов из биологического материала 24
1.6.1. Экстракция 24
1.6.2. Осаждение из раствора 24
1.6.3. Центрифугирование в градиенте плотности 25
1.6.4. Хроматография 25
1.7. Количественный и качественный анализ протеогликанов 28s,.
1.7.1. Обнаружение с помощью красителей и цветных реакций 28
1.7.2. Обработка специфическими ферментами 30
1.8. Масс-спектрометрическая идентификация протеогликанов 31
2. Материалы и методы исследования 34
2.1. Реактивы и материалы 34
2.2. Методы 34
2.2.1. Миобласты L6Л и их культивирование 34
2.2.2. Выделение протеогликанов 35
2.2.3. Анализ углеводного состава протеогликанов 37
2.2.4. Электрофоретический анализ коровых белков протеогликанов 37
2.2.5. Масс-спектрометрический анализ протеогликанов 38
2.2.6. Изучение действия протеогликанов на адгезию миобластов 39
2.2.7. Изучение влияния гликозаминогликанов в комбинации с фактором роста фибробластов на пролиферацию миобластов 40
2.2.8. Изучение влияния гликозаминогликанов и протеогликана декорина на диф ференцировку миобластов 41
3. Результаты 45
3.1. Выделение протеогликанов из культуральнои среды, клеток и ВКМ 45
3.1.1. Анализ эффективности процедуры разделения протеогликанов культуральнои среды, клеток и ВКМ 45
3.1.2. Ионообменная хроматография протеогликанов на Q-сефарозе 47
3.2. Анализ углеводного состава протеогликанов 51
3.3. Электрофоретический анализ протеогликанов 51
3.3.1. Электрофоретический анализ фракций протеогликанов миобластов, ВКМ и культуральнои среды, полученных после разделения на Q-сефарозе 52
3.3.2. Оценка эффективности выявления коровых белков протеогликанов на примере декорина 52
3.3.3. Выявление коровых белков выделенных протеогликанов 53
3.4. Масс-спектрометрическая идентификация протеогликанов 57
3.5. Действие протеогликанов на адгезию миобластов 65
3.6. Влияние основного фактора роста фибробластов в комбинации с гликозаминогликанами(хондроитинсульфатом, дерматансульфатом, гепарином) на пролиферацию миобластов 67
3.7. Влияние гликозаминогликанов (хондроитинсульфата, дерматансульфата, гепарина) и протеогликана декорина на дифференцировку миобластов 70
4. Обсуждение результатов 76
5. Выводы 91
6. Список работ, опубликованных по теме диссертации 92
7. Список цитируемой литературы 93
