Введение
Глава I. Обзор литературы 17
1.1 Возбудители черной ножки картофеля 17
1.2 Возбудитель кольцевой гнили картофеля 26
1.3 Особенности оценки устойчивости сортов 32
1.4 Обзор современных методов диагностики бактериозов картофеля 35
1.4.1 Иммунохимические методы диагностики 35
1.4.1.1 ИФА 40
1.4.1.2 ИХА 49
1.4.1.3 ИФМ 53
1.4.2 Молекулярно-генетические методы диагностики 57
1.4.2.1 ПЦР 57
Глава II. Материалы и методы 60
2.1 Реактивы и оборудование 60
2.2 Подготовка образцов бактериальных культур 61
2.3 Получение специфических частей тест-систем ИФА к Cms, Pa и Dic 63
2.4 Получение специфических частей тест-систем ИХА к Cms, Pa и Dic 71
2.5 Разработка классических DAS-ELISA тест-систем ИФА к Cms, Pa и Dic 77
2.6 Разработка тест-систем ИХА в полосочном и точечном форматах к Cms, Pa и Dic 78
2.7 Определение зараженности картофеля Cms, Pa и Dic методом ИФА 78
2.8 Определение зараженности картофеля возбудителем Cms методом realime ПЦР 81
2.9 Сравнительные исследования 85
Глава III. Результаты исследований и обсуждение 92
3.1 Получение специфических частей тест-систем ИФА и ИХА к штаммам Cms, Pa и Dic 92
3.2 Усовершенствование методов диагностики возбудителей бактериозов картофеля 108
3.2.1 Определение аналитических характеристик созданных диагностических тест-систем ИФА для оптимизации условий выявления Cms, Ра и Dic 108
3.2.2 Определение аналитических характеристик созданных диагностических тест-систем ИХА для выявления Cms, Pa и Dic 112
3.2.3 Создание диагностических наборов ИФА серии «Иммунотест» для определения Cms, Pa и Dic 122
3.3 Определение распространения Сms, Pa и Dic на семенном картофеле методом ИФА 128
3.4 Определение распространения Cms на картофеле в России на основе результатов, полученных методом realime ПЦР 134
3.5 Оптимизация условий проведения ПЦР для диагностики Pcc 145
3.6 Сравнение диагностических возможностей ПЦР, ИФА, ИХА и ИФМ при тестировании картофеля на зараженность Сms, Pa и Dic 148
3.6.1 Сравнительное испытание тест-систем для выявления Cms 148
3.6.2 Сравнительное испытание тест-систем для выявления Pa 152
3.6.3 Сравнительное испытание тест-систем для выявления Dic 155
3.6.4 Сравнительное испытание выявления Cms различными комбинациями из трех методов: ИФМ, FLASH-ПЦР и realime ПЦР 158
3.7 Определение оптимальной для культивирования возбудителей бактериозов (на примере Cms) картофеля питательной среды 161
Заключение 166
Практические рекомендации 169
Список литературы 170
Приложения 204
