Введение
ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 9
1.1. Комары как переносчики опасных заболеваний 9
1.1.1. Среда обитания и физиология развития комаров 10
1.2. Методы борьбы с комарами 12
1.3. Бактериальные средства борьбы с личинками комаров 14
1.4. Энтомопатогенные грибы как потенциальные агенты борьбы с личинками комаров 17
1.4.1. Энтомапатогенный гриб Tolypocladium cylindrosporum как агент биологического контроля личинок кровососущих комаров „18
1.4.2. Механизм патогенеза личинок кровососущих комаров
под действием гриба Tolypocladium cylindrosporum 19
1.4.3. Особенности культивирования гриба Т.cylindrosporum. Жизнеспособность клеток 20
1.5. Препаративные формы биологических препаратов 22
1.6. Иммобилизация микроорганизмов как способ повышения стабильности клеток микроорганизмов 23
1.7. Заключение 25
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 28
2.1. Объекты исследований 28
2.2. Питательные среды для культивирования 28
2.2.1. Питательные среды глубинного культивирования 28
2.2.2. Питательные среды для поверхностного культивирования 29
2.3. Культивирование бактерий и грибов 29
2.3.1. Приготовление инокулята 29
2.3.2. Глубинное культивирование бактерий и грибов 29
2.3.3. Культивирование бактерий и грибов на твердых питательных средах 30
2.4. Методы количественного учета и морфологического состояния культур микроорганизмов 30
2.4.1. Определение концентрации клеток микроорганизмов (КОЕ) высевом на плотные питательные среды (метод Коха) 30
2.4.2. Определение концентрации сухой биомассы микроорганизмов 31
2.4.3. Методы контроля морфологического состояния микроорганизмов 31
2.5. Иммобилизация клеток микроорганизмов в Са-альгинатном геле 32
2.6. Метод контроля концентрации клеток в Са-альгинатных гранулах 33
2.7. Культивирование иммобилизованных клеток во влажной камере 34
2.8. Определение протеолитической активности 34
2.9. Оценка ларвицидной активности микроорганизмов
в свободном и иммобилизованном состоянии 35
2.10. Характеристики реактивов 35
ГЛАВА III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 38
ЧАСТЬ 3.1. Энтомопатогенный гриб Tolypocladium cylindrosporum как агент биоконтроля численности личинок комаров 38
3.1.1. Отбор энтомопатогенного гриба с наибольшей ларвицидной активностью.. 38
3.1.2. Глубинное культивирование микроскопического гриба Tolypocladium cylindrosporum 41
3.1.3. Глубинное культивирование Tolypocladium cylindrosporum на питательных средах с различными источниками углерода.
Оценка ларвицидной активности 44
3.1.4. Глубинное культивирование Tolypocladium cylindrosporum на питательных средах, содержащих н-алканы как источники углерода 49
3.1.5. Глубинное культивирование Tolypocladium cylindrosporum на питательных средах, растительные масла как источники углерода 49
3.1.6. Изучение механизма ларвицидной активности Tolypocladium cylindrosporum.52
3.1.7. Исследование ларвицидной активности Tolypocladium cylindrosporum на разных стадиях развития микроорганизма
при глубинном культивировании 56
3.2. Иммобилизация Tolypocladium cylindrosporum в Са-альгинатном геле 59
3.2.1. Обоснование выбора метода и носителя для иммобилизации 59
3.2.2. Исследование метаболизма Tolypocladium cylindrosporum альгината натрия и альгината кальция 60
3.2.3. Рїммобилизация Tolypocladium cylindrosporum в Са-альгинатном геле. Получение плавающих гранул. Оценка плавучести гранул 63
3.3. Оценка ларвицидной активности Tolypocladium cylindrosporum в иммобилизованном состоянии 66
3.4. Исследование ларвицидной активности при иммобилизации Tolypocladium cylindrosporum в Са-альгинатыне гранулы с различными субстратами 68
3.5. Кинетика и физиология роста Tolypocladium cylindrosporum из Са-альгинатных гранул. Физиология развития внутри гранулы 70
3.5.1. Рост Tolypocladium cylindrosporum из Са-альгинатных гранул 70
3.5.2. Кинетика и физиология роста микроскопического гриба Tolypocladium cylindrosporum, иммобилизованного
в Са — альгинатном геле различной концентрации 76
3.5.3. Кинетика и физиология роста микроскопического гриба Tolypocladium cylindrosporum, иммобилизованного в Са — альгинатном геле с добавлением различных концентраций крахмала 78
3.5.4. Кинетика и физиология роста микроскопического гриба Tolypocladium cylindrosporum, иммобилизованного в Са — альгинатном геле с добавлением подсолнечного масла и крахмала 79
3.5.5. Кинетика и физиология роста микроскопического гриба Tolypocladium cylindrosporum, иммобилизованного в Са - альгинатном геле с добавлением подсолнечного масла 82
3.5.6. Кинетика и физиология роста микроскопического гриба Tolypocladium cylindrosporum, иммобилизованного в Са - альгинатном геле с добавлением различных масел 84
Bacillus thuringiensis var. israelensis как агент биоконтроля личинок комаров 88 Определение ларвицидной активности различных штаммов Bacillus thuringiensis var. israelensis. Выбор штамма 89
Глубинное культивирование Bacillus thuringiensis var. israelensis на жидкой питательной среде. Физиология развития микроорганизма. Кривая роста, изменения рН, протеолитическая активность 91
Рїммобилизация Bacillus thuringiensis var. israelensis в Са-альгинатном геле. Определение ларвицидной активности Bacillus thuringiensis var. israelensis в иммобилизованном состоянии 94
Иммобилизация Bacillus thuringiensis var. israelensis на различных стадиях развития с последующей оценкой ларвицидной активности 95
Исследование влияния Bacillus thuringiensis var. israelensis на рост и Развитие Tolypocladium cylindrosporum в свободном и иммобилизованном состоянии 99
Исследование влияния свободных клеток Bacillus thuringiensis var.israelensis нарост мицелия Tolypocladium cylindrosporum из гранулы 100
Исследование изменения в течение времени концентрации клеток Bacillus thuringiensis var. israelensis и Tolypocladium cylindrosporum, иммобилизованных в одной грануле 100
Исследование роста Tolypocladium cylindrosporum из гранул при иммобилизации отдельно и совместно с клетками культуры Bacillus thuringiensis var. israelensis 102
Создание препаративной формы биопрепарата для борьбы
с личинками комаров 104
Изучение влияния на личинки малярийных комаров различных соотношений гранул Т.cylindrosporum и В. thuringiensis var. israelensis 104
Определение эффективной дозы препарата 111
Изучение срока хранения иммобилизованного препарата для борьбы с личинками комаров 112
Проведение производственных испытаний 116
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 118
ВЫВОДЫ 119
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 121
ПРИЛОЖЕНИЕ 1: Акты испытаний 134
ПРИЛОЖЕНИЕ 2: Научный отчет по изучению биологической активности 139
ПРИЛОЖЕНИЕ 3: Технические условия 150
