Введение
1. Роль рн в функционировании клеток 8
1.1.Влияние рН на внутриклеточные процессы 8
1.2. Анализ.методов измерения внутриклеточных рН. 13
1.2.1.Измерение рН выделенной из клеток цитоплазмы простыми электродами 14
1.2.2.Микроэлектродный метод определения внут риклеточного рН 14
1.2.3.Определение рН клеток по распределению жирорастворимых слабых кислот или осно ваний 16
1.2.4.Определение рН клеток с помощью колори метрии или фдуориметрии 21
1.2.5.Метод определения рН клеток с помощью ядерно-магнитного резонанса 26
2. Разработка метода прижзненного опрщеленш внутриклеточного рн. точность метода 31
2.1. Выбор красителя. З1
2.2. Материал и методы 39
2.З. Обоснование метода 46
2.3.1. Результаты спектрального анализа растворов нейтрального красного. Выбор длин волн 46
2.З.2. Построение калибровочных кривых. 54
2.4. Анализ погрешностей метода. 57
2.4.1. Правомочность экстраполяции зависимости K=f(pH) в областьной концентрации нейтрального красного 61
2.4.2. Точность определения рН структур с различной концентрацией нейтрального красного. 62
2.4.3. влияние накопления нейтрального красно го на рН самой структуры 69
2.4.4. Связь нейтрального красного с белками 71
2.4.5. Связь нейтрального красного с мембранами 75
2.4.6. Изменение ионной силы среды 76
2.4.7. Спектральная ширина щели монохроматора 79
2.4.8. Точность записи спектра 80
2. 4.9. -Рассеянный свет; эффект Шварцшильда-Виллигера 82
2.4.10. Свет люминесценции нейтрального красного 84
2.4.11. Положение измерительного зонда и фокуси ровка объекта 87
2.4.12. Суммарная ошибка измерения рН. Проверка разработанного метода 87
3. Использование разработашого метода. для при жизненного исследования рн лизосом и цито плазмы в норме и при различных воздействиях. 95
3.1. Краткая характеристика лизосомального аппара та клеток 95
3.2. Нейтральный красный и гранулообразование в клетках. 99
3.З. Материал и методы 100
3.4. Определение и характеристика рН лизосом клеток культуры ткани 108
3.5. Оценка возможного влияния температуры инкубации на состояние клеток и величину внутрилизосомального рН 111
3.5.1. Обоснование проведения экспериментов при 20С 111
3.5.2.Сравнение включения 3Н-тимидина в ДНК кле ток при 37 и 20С 125
3.5.3. Сохранение клетками способности к делению и к синхронизации митозов после длительного воздействия комнатной температуры 127
3.5.4. Сравнение рН лизосом клеток при 37 и 20С. 130
3.6. Длияние различных агентов на рН внутриклеточных структур 132
3.6.1. Длияние концентрации нейтрального красного в среде на рН внутриклеточных структур. 132
3.6.2. Влияние рН среды на величину рН лизосом и цитоплазмы 137
3.6.3. Действие протонофоров на величину рН ли зосом и цитоплазмы клеток 141
3.6.4. Действие моноиодацетата 143
3.6.5. Действие амитала 144
Заключение 149
