Введение
1 Литературный обзор 10
1.1 Генномодифицированная продукция и ее значение 10
1.2 Вопросы безопасности ГМО, необходимость контроля и маркировки 12
1.3 Методы определения ГМО 14
1.3.1 Методы определения ГМО на основе анализа нуклеиновых кислот 16
1.3.2 Методы определения ГМО на основе анализа белков 25
2 Собственные исследования
2.1 Цель и задачи исследования 30
2.2 Материалы и методы 30
2.2.1 Отбор и подготовка проб для исследования 31
2.2.2 Методика выделение ДНК с использованием детергента СТАВ. 31
2.2.3 Методика выделения ДНК с использованием сорбента Silica 33
2.2.4 Методика качественного определения ГМИ на основе ПЦР с электрофоретической детекцией ампликонов 35
2.2.5 Методика качественного определения ГМИ с помощью ПЦР в реальном времени 41
2.2.6 Методика количественного определения ГМИ с помощью ПЦР в реальном времени 43
2.2.7 Методика идентификации ГМО с применением биологического микрочипа (ГОСТ Р 52174-2003) 46
2.2.8 Методика определения ГМО на основе амплификации с 46 последующей ДНК-гибридизацией с использованием тест-систем SureFood 2.2 9 Модифицированная методика определения ГМО с применением ДНК-зондов иммобилизованных на мембранных биочипах 48
2.2 10 Методика иммунохроматографического определения трансгенных белков 50
2.2.11 Статистическая обработка результатов 50
2.3 Результаты исследований
2.3.1. Разработка методов определения трансгенных белков в растительном сырье и растительных кормах на основе иммунохроматографии 50
2.3.2. Валидация иммунохроматографического метода для определения ГМО в продуктах и кормах, содержащих ингредиенты животного и растительного происхождения 55
2.3.3. Совершенствование определения ГМО на основе ПЦР с последующей ДНК-гибридизацией 59
2.3.4. Разработка модифицированного метода определения ГМО с использованием ДНК-чипов 67
2.3.5. Количественное определение ГМО на основе ПЦР в режиме «реального времени» 70
2.3.6. Проведение мониторинговых исследований по выявлению ГМО в продуктах и кормах с использованием различных методов ДНК- и иммунодиагностики 76
3. Обсуждение результатов 80
4. Выводы 90
5. Предложения для практики 92
6. Список литературы 93
