Введение
Литературный обзор 11
1. Инсулин 11
2. Способы производства инсулина человека 20
2.1. Подуемнтстический и генно-инженерный способы 20
2.2. Ферментаивное превращение предшественника в инсулин .31
2.3. Методы очистки инсулина 35
2.4. Валидация процессов и аналитического контроля в производстве
биофармацевтических препаратов 49
3. Фармацевтические аналоги генно-инженерного инсулина 53
Результаты и обсуждение 63
1. Постановка задачи 63
2. Ферментативный гидролиз предшественника инсулина 66
2.1. Внутрипроизводственный контроль ферментативного гидролиза 67
2.2. Ферментативный гидролиз: влияние температуры 74
2.3. Ферментативный гидролиз: оптимальные концентрации реагентов .76
2.4. Производственный ферментативный гидролиз 81
2.5. Ферментативный гидролиз: обратимая модификация лизина (Б29) 82
3. Разработка и валидация метода контроля производства ГИЧ 85
3.1. Линейность 85
3.2. Правильность и точность (сходимость и воспроизводимость) 86
3.3. Предел обнаружения и нижний предел количественной оценки 88
3.4. Специфичность 89
3.5. Устойчивость метода 91
3.6. Выводы 94
4. Хроматографическая очистка инсулина 96
4.1. Подготовка опытного образца 97
4.2. Изучение состава подвижной фазы 98
4.3. Определение оптимальной наїрузки на сорбент 107
4.4. Определение оптимальной геометрии колонны 110
4.5. Подбор оптимальной неподвижной фазы 117
4.6. Очистка от эндотоксинов клеточной стенки, проинсулинподобных полипептидов и высокомолекулярных примесей 121
4.7. Производственная очистка инсулина 124
4.8. Валидация процесса хроматографической очистки инсулина... 126
5. Технология получения и очистки инсулина-аспарта и инсулина-лизпро. 129
Материалы, приборы и методы 134
1. Материалы 134
1.1. Реактивы 134
1.2. Хроматографические сорбенты и колонны 135
2. Приборы 137
2.1. Хроматографические системы 137
2.2. Оборудование 138
3. Методы . 138
3.1. Контроль производства ГИЧ методом ОФ ВЭЖХ ..138
3.2. Контроль содержания дТИ методом ион-парной ОФ ВЭЖХ 139
3.3. Контроль содержания ВМП методом SEC 140
3.4. Получение рекомбинаитных предшественников ..140
3.5. Проведение ферментативного гидролиза 141
3.6. Проведение ВЭЖХ-очистки 142
3.7. Проведение гель-фильтрации 143
Выводы 144
Список опубликованных работ 147
Благодарности 151
Библиография 152
