Введение
Глава 1. Материалы и методы исследования 41
1.1. Материалы и реактивы 41
1.1.1. Среды и сыворотки 41
1.1.2. Реактивы 41
1.1.3. Препараты 41
1.1.4. Моноклональные антитела 41
1.1.5. Клеточные линии 42
1.1.6. Экспериментальная модель опухолевого роста 42
1.1.7. Режимы введения и дозы циклоплатама in vivo 43
1.1.8. Оценка результатов 43
1.2. Методы исследования 44
1.2.1. Метод получения больших многослойных липосом доксорубицина и циклоплатама 44
1.2.2. Получение малых однослойных липосом 44
1.2.3. Метод количественного определения доксорубицина и циклоплатама в липосомах 45
1.2.4. Измерение размера липосом с доксорубицином и циклоплатамом 46
1.2.5. Прямая реакция иммунофлюоресценции 46
1.2.6. Определение функциональной активности P-gp 46
1.2.7. Определение клеточной гибели 47
1.2.7.1. Проточно-цитофлюориметрический анализ 47
1.2.7.2. Определение гибели клеток с помощью Annexin V 47
1.2.7.3. Исследование цитотоксической активности in vitro с помощью МТТ-теста 48
1.2.8. Электронно-микроскопическое исследование 49
Глава 2. Создание липосомального доксорубицина и изучение его цитотоксической активности
2.1. Получение больших многослойных липосом с доксорубицином 50
2.1.1. Методика получения больших многослойных липосом с доксорубицином 50
2.2. Получение малых однослойных липосом с доксорубицином 51
2.2.1. Методика получения малых однослойных липосом с доксорубицином 51
2.3. Стандартизация малых однослойных липосом с доксорубицином 51
2.3.1. Измерение размера липосом 51
2.3.2. Количественное определение доксорубицина в липосомах 52
2.4. Элекронно-микроскопическое исследование 54
2.5. Исследование включения доксорубицина внутри липосом 57
2.6. Изучение цитотоксической активности липосом с доксорубицином in vitro 60
2.7. Сравнение липосомального и свободного доксорубицина по накоплению в клетках 69
Глава 3. Создание липосомального циклоплатама и изучение его цитотоксической активности 74
3.1.1. Методика получения больших многослойных липосом с циклоплатамом 74
3.2. Получение малых однослойных липосом с циклоплатамом 75
3.2.1. Методика получения малых однослойных липосом с циклоплатамом 75
3.3. Стандартизация малых однослойных липосом с циклоплатамом 75
3.3.1. Измерение размера липосом 75
3.3.2. Количественное определение доксорубицина в липосомах 76
3.4. Изучение цитотоксическои активности липосомального циклоплатама in vitro 78
3.5. Изучение противоопухолевой активности липосомального циклоплатама in vivo 85
Обсуждение и выводы 90
Список литературы 96
