Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Гибридизационно-флуоресцентные амшшфикационные тест-системы в ДІЖ-диагностике инфекционных заболеваний 14
1.2. Молекулярно-генетические методы идентификации патогенных буркхольдерий 24
1.3. Способы подготовки проб исследуемого материала и очистки ДНК микроорганизмов для проведения генодиагностики 32
ГЛАВА 2. Материалы и методы 40
2.1. Штаммы микроорганизмов, питательные среды, условия культивирования 40
2.2. Подготовка проб биологического материала, из объектов внешней среды и пищевых продуктов для анализа методом ПЦР 45
2.3. Концентрирование клеток патогенных буркхольдерий на этапе подготовки проб из объектов внешней среды 46
2.4. Выделение ДНК 47
2.5. Постановка реакции амплификации с флуоресцентными олигонуклеотидными зондами 51
2.6. Проведение электрофореза и флуоресцентная детекция продуктов амплификации. Учет результатов ПЦР 53
2.7. Моделирование экспериментальной инфекции 53
2.8. Статистическая обработка результатов 54
ГЛАВА 3. Подбор праймеров и олигонуклеотидньк зондов для конструирования гибридизационно -флуоресцентных амплификациошшх тест-систем 55
3.1. Выбор и характеристика праймеров и гибридизационных олигонук-леотидных зондов для обнаружения Burkholderia pseudomallei и Burk-holderia mallei 55
3.2. Оптимизация условий проведения реакции амплификации на препаратах ДНК возбудителей сапа и мелиоидоза 61
ГЛАВА 4. Оценка специфичности сконструированных праимеров и зондов для обнаружения возбудителей сапа и мелиоидоза
ГЛАВА 5. Выбор оптимального способа подготовки проб почвы и пищевых продуктов для последующей постановки ПЦР 82
5.1. Определение эффективности различных способов очистки и выделения ДЬЖ возбудителей сапа и мелиоидоза для их обнаружения методом ПЦР в пробах почвы и пищевых продуктов 82
5.2 Использование магноиммуносорбентов при исследовании проб, контаминированных патогенными буркхольдериями
ГЛАВА 6. Генодиагностика сапа и мелиоидоза при экспериментальной инфекции
Заключение 98
Выводы 108
Список литературы 111
