Введение
1. Обзор литературы 12
1.1. Индуцированный мутагенез и его медицинские последствия 12
1.2. Источники генотоксических воздействий 15
1.2.1. Эндогенные 15
1.2.2. Средовые 17
1.2.3. Пищевые 20
1.2.4. Лекарственные 22
1.3. Методология оценки генотоксических повреждений 27
1.3.1. Регистрация первичных повреждений ДНК 27
1.3.2. Регистрация генных мутаций 29
1.3.3. Регистрация хромосомных мутаций 32
1.3.4. Регистрация геномных мутаций 34
1.4. Оценка генотоксичности в системе доклинических исследований безопасности лекарственных средств 36
1.5. Методологические проблемы оценки генотоксических эффектов в половых клетках 41
1.5.1. Методы и подходы к оценке генотоксических эффектов в половых клетках 41
1.5.2. Особенности мужского и женского гаметогенеза как фактор различной чувствительности к генотоксическим воздействиям 47
1.5.3. Методические проблемы детекции цитогенетических нарушений в ооцитах 53
2.Материалы и методы исследования 56
2.1. Материалы 56
2.1.1. Экспериментальные животные 56
2.1.2. Реактивы 57
2.1.3. Расходные материалы 58
2.1.4. Использованные соединения 58
2.2. Методы 62
2.2.1. Метод цитогенетического анализа ооцитов мышей 62
2.2.2. Метод гель-электрофореза изолированных клеток (метод «ДНК-комет») 68
3. Результаты исследования 71
3.1. Разработка метода цитогенетического анализа ооцитов 71
3.1.1. Подбор доз для гормональной суперовуляции 71
3.1.2. Подбор условий гипотонической обработки и спиртовой фиксации 72
3.1.3. Подбор условий гипотонической обработки и фиксации ооцитов параформальдегидом 76
3.1.4. Подбор условий удаления зоны пеллюцида 83
3.1.5. Подбор условий высушивания 85
3.1.6. Подбор условий окрашивания 85
3.2. Цитогенетические эффекты модельных генотоксикантов в ооцитах 88
3.2.1. Колхицин 89
3.2.2. Паклитаксел 89
3.2.3. Этопозид 91
3.2.4. Доксорубицин 95
3.2.5. Мелфалан 96
3.2.6. Циклофосфамид 99
3.2.7. Цисплатин 102
3.2.8. Метотрексат 102
3.2.9. Диоксидин 105
3.3. Цитогенетические эффекты кофеина, акриламида и бисфенола А 107
3.3.1. Кофеин 107
3.3.2. Акриламид 107
3.3.3. Бисфенол А 108
3.4. Оценка мутаген-модифицирующей активности в ооцитах 112
3.4.1. Ацетилцистеин 112
3.4.2. Афобазол 113
3.4.3. Полиоксидоний 117
3.4.4. Бетаин 117
3.5. Оценка уровня повреждений ДНК фолликулярных клеток и ооцитов методом гель-электрофореза отдельных клеток (метод «ДНК-комет») 122
4. Обсуждение результатов 128
5. Выводы 153
6. Практические рекомендации 154
7. Список сокращений 155
8. Список литературы 156
9. Благодарности 184
