Введение
1. Литературный обзор 8
1.1. Характеристика иерсиний и их распространение в объектах ветеринарно-санитарного контроля 8
1.2. Методы индикации и идентификации иерсиний 15
1.2.1. Бактериологический метод индикации Y. enterocolitica 16
1.2.2. Иммунологические методы 18
1.2.3. Методы ДНК-диагностики 22
2. Собственные исследования 35
2.1. Материалы исследований 35
2.2. Методы исследований 35
2.2.1. Выделение хромосомных ДНК бактерий 35
2.2.2. Выделение плазмидной ДНК 37
2.2.3. Включение тритиевои метки в ДНК методом ник-трансляции 38
2.2.4. Включение биотиновой метки в ДНК методом ник-трансляции 39
2.2.5. Получение меченых зондов с помощью
полимеразной цепной реакции 40
2.2.6. Гибридизация ДНК с тритиевои меткой 41
2.2.7. ДНК-гибридизация с использованием тест-набора с ДНК-зондами, меченными биотином 42
2.2.8. Методика гибридизации колоний 47
2.2.9. Методика полимеразной цепной реакции 48
2.2.10. Амплификация ДНК методом рассеянной затравки 49
2.2.11. Статистическая обрабока результатов 50
2.3. Результаты исследований 50
3 Разработка тест-системы индикации Y. enterocolitica на основе ПЦР 50
Разработка методов и тест-систем индикации Y. enterocolitica с использованием генных зондов 54
Разработка методик индикации патогенных штаммов Y.enterocolitica с использованием плазмидной ДНК 65
Оценка методов и тест-систем ДНК-диагностики для выявления Y.enterocolitica при мониторинге кормов и мясной продукции 72
Обсуждение результатов 78
Выводы 92
Предложения для практики 94
Список литературы
