Введение
2.Обзор литературы 10
2.1. Вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней 10
2.1.1. Классификация вируса РРСС 10
2.1.2.0рганизация генома вируса РРСС, структурные и неструктурные белки 11
2.1.3.Вариабельность вируса РРСС 14
2.2. Особенн Классификация вируса РРСС сти иммунитета при РРСС 18
2.2.1.Клеточный иммунитет 18
2.2.2.Гуморальный иммунитет 19
2.3. Диагностика заболевания РРСС 23
2.3.1.Обнаружение антигена вируса РРСС 24
2.3.2. Обнаружение антител, специфичных к вирусу РРСС 25
2.4. Критерии для стандартизации методов исследования в применении к диагностическим тестам по обнаружению антител 28
2.5. Заключение по обзору литературы 31
3. Собственные исследования 33
3.1.Матери алы 33
3.1.1.Вирус и вируссодержащие материалы 33
3.1.2.Культуры клеток 33
3.1.3. Рекомбинантный антиген вируса РРСС 34
3.1.4.Сыворотки 34
3.1.5.Моноклональные антитела 34
3.1.6.Растворы и реактивы, использованные в работе 35
3.1.7.0борудование 37
3.2.Методы исследования 37
3.2.1. Иммуноферментный анализ 37
3.2.2. Прямой сэндвич-вариант ИФА 37
3.2.3. Прямой блокирующий вариант ИФА 38
3.2.4. Непрямой вариант ИФА 39
3.2.5.Статистический анализ полученных результатов 39
4.Результаты собственных исследований 40
4.1.Определение активности рекомбинантного нуклеокапсидного белка (rNC) на основе прямого сэндвич-варианта ИФА 40
4.2 Оптимизация условий постановки прямого блокирующего варианта ИФА для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней 44
4.3.Разработка тест-системы на основе непрямого варианта ИФА с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка (rNC) для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней 48
4.4.0птимизация условий постановки непрямого варианта ИФА с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка (rNC) для определения антител к вирусу РРСС в одном разведении сыворотки крови 55
4.5.Сравнение результатов тестирования сывороток крови, полученных в Н-ИФА с результатами, полученными с применением IDEXX-ИФА и HIPRA-ИФА 62
4.6. Применение тест-системы на основе непрямого варианта ИФА с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка (rNC) для исследования сывороток крови от инфицированных или вакцинированных животных 66
4.7.Применение разработанной тест-системы на основе непрямого варианта ИФА с использованием рекомбинантного нуклеокапсидного белка (rNC) для ретроспективной диагностики РРСС
5.Обсуждение результатов исследования 81
6.Выводы 92
7.Практические предложения 93
8.Список использованной литературы
