Введение
1. Литературный обзор 6
1.1. Идентификация мяса и мясной продукции 6
1.1.1. Метод электорофоретического разделения белков: принципы и использование в экспертизе пищевых продуктов . 11
1.1.2. Энзимологические методы 15
1.2 Иммунологические и молекулярногенетические методы идентификации продукции. 18
2. Собственные исследования 44
2.1. Цель и задачи исследования 44
2.2. Объекты и методы исследования 44
2.2.1 Методика выделения ДНК из мяса крупного рогатого скота.
2.2.2. Мечение биотином бактериальных ДНК методом ник-трансляции 45
2.2.3. Мечение ДНК методом «рассеянной затравки» 45
2.2.4. Методика получения меченых ДНК зондов с помощью полимеразной цепной реакции 47
2.2.5. Методика точечной ДНК-гибридизации на мембранных фильтрах с биотинилированной ДНК 48
2.2.6. Методика гибридизации нуклеиновых кислот с тритиевои меткой 49
2.2.7. Методика полимеразной цепной реакции 50
2.2.8. Методика определения видовой принадлежности мяса методом иммунодиффузии в геле 51
2.2.9. Статистическая обработка результатов
2.3 Результаты исследований 53
2.3.1. Разработка модификаций методов определения видовой принадлежности мяса и мясопродуктов на основе ПЦР 53
2.3.1.1. Разработка метода идентификации говядины на основе ПЦР и электрофоретического разделения амплификатов 53
2.3.1.2. Разработка модификации метода количественного определения ДНК говядины на основе ПЦР с меченными нуклеозидтрифосфатами
2.3.2. Разработка модификаци методов определения видовой принадлежности мяса крупного рогатого скота на основе ДНК-зондов 61
2.3.3. Разработка тест-системы видовой принадлежности мяса и субпродуктов первой категории на основе реакции иммунодиффузии в геле 68
2.3.4. Приборная реализация методов идентификации мяса 70
2.3.4.1. Автоматизация методов идентификации мяса 70
2.3.5. Разработка тест-систем идентификации мяса для стационарных и полевых условий 76
2.3.5.1. Приборная реализация методов идентификации для нестационарных условий 76
3. Обсуждение результатов 82
4. Предложения для практики 92
Выводы 93
Список литературы 95
Приложение
