Введение
ГЛАВА 1. Свойства и терапевтический потенциал флаволигнанов силимарина из расторопши пятнистой (обзор литературы) 13
1.1. История применения расторопши пятнистой в медицине 13
1.2. Химический состав расторопши пятнистой 17
1.3. Структура и физико-химические свойства флаволигнанов силимарина 19
1.4. Терапевтический потенциал силимарина при различных патологиях 22
1.4.1. Гепатопротекторная активность силимарина 22
1.4.1.1. Патогенез заболеваний печени 22
1.4.1.2. Особенности повреждения печени под действием алкоголя 26
1.4.1.3. Особенности повреждения печени токсинами грибов 28
1.4.1.4. Механизмы гепатопротекторного действия силимарина 29
1.4.2. Терапевтический потенциал силимарина в профилактике и лечении заболеваний поджелудочной железы 34
1.4.3. Противоопухолевая активность силимарина 36
1.5. Пути увеличения биодоступности флаволигнанов силимарина 43
Заключение к главе 1 47
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 48
2.1. Определение наличия флаволигнанов в плодах расторопши пятнистой 48
2.1.1. Цианидиновая реакция (проба Синода) 48
2.1.2. Тонкослойная хроматография (ТСХ) 48
2.2. Количественное определение суммы флаволигнанов в плодах расторопши пятнистой 48
2.3. Количественное определение силикристина в плодах расторопши пятнистой 48
2.4. Выделение суммы флаволигнанов из плодов расторопши пятнистой 49
2.5. Количественное определение флаволигнанов 51
2.6. Выделение силикристина из суммы флаволигнанов расторопши пятнистой 51
2.7. Качественный анализ силикристина 52
2.7.1. Тонкослойная хроматография 52
2.7.2. Хромато-масс-спектрометрический метод 52
2.8. Количественное определение силикристина в субстанции 53
2.9. Определение растворимости силикристина в очищенной воде 53
2.10. Определение температуры плавления силикристина 53
2.11. Определение посторонних примесей в субстанции силикристина 54
2.12. Получение липосомной формы силикристина 54
2.13. Определение степени включения силикристина в липосомы 55
2.14. Изучение липосомных частиц с помощью электронной микроскопии 56
2.15. Определение размеров липосомных частиц 56
2.16. Определение остаточного растворителя хлороформа в лиофилизате липосомного силикристина 57
2.17. Определение посторонних примесей в лиофилизате липосомного силикристина 57
2.18. Количественное определение силикристина в лиофилизате липосом 58
2.19. Определение сроков годности субстанций 59
2.20. Исследование антитоксической активности образцов in vitro 60
2.20.1. Определение скорости монооксигеназных реакций, катализируемых цитохромом Р450 60
2.20.2. Определение скорости реакции конъюгации 2,4-динитрохлорбензола с глутатионом, катализируемой глутатионтрансферазой 61
2.21. Получение нековал ентного комплекса силикристина с полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ-силикристин) 61
2.22. Исследование гепатозащитной активности препаратов in vivo 62
2.22.1. Постановка эксперимента 62
2.22.2. Определение маркеров гепатита в сыворотке крови экспериментальных животных 62
2.22.3. Микроскопическое исследование морфологии печени экспериментальных животных 64
2.23. Статистическая обработка результатов 64
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение 65
3.1. Выделение суммы флаволигнанов и силикристина из плодов расторопши пятнистой 65
3.1.1. Выделение суммы флаволигнанов из плодов расторопши пятнистой 65
3.1.2. Выделение силикристина из суммы флаволигнанов расторопши пятнистой 69
3.1.3. Стандартизация силикристина 69
3.2. Получение липосомной формы силикристина и исследование ее биологической активности in vitro 76
3.2.1. Получение липосомной формы силикристина 76
3.2.2. Стандартизация субстанции липосомного силикристина 78
3.3. Изучение антитоксической активности липосомного силикристина
в экспериментах in vitro 81
3.3.1. Изучение влияния липосомной формы силикристина и свободного силикристина на скорость реакций микросомального окисления, катализируемых цитохромом Р450 81
3.3.2. Изучение влияния липосомной формы силикристина и свободного силикристина на скорость реакции конъюгации, катализируемой глутатионтрансферазой 84
3.4. Исследование гепатозащитных свойств липосомной формы силикристина в экспериментах in vivo 88
3.4.1. Влияние липосомной формы силикристина и свободного силикристина на активность ферментов-маркеров гепатита и содержание общего билирубина в сыворотке крови экспериментальных животных 88
3.4.2. Влияние липосомной формы силикристина и свободного силикристина на морфологию печени 91
3.5. Увеличение био доступности и гепатозащитной активности силикристина с помощью
полиэтиленгликоля 93
3.5.1. Влияние препарата ПЭГ-силикристин на активность ферментов АсАТ, АлАТ, ЩФ и содержание общего билирубина в сыворотке крови экспериментальных животных 94
3.5.2. Влияние препарата ПЭГ-силикристин на морфологию печени 97
Общие выводы 100
Список литературы 101
Приложения 130
