Введение
Глава 1. Обзор литературы. 10
1.1 Источники стволовых клеток, используемых для трансплантации . 10
1.2 История трансплантаций ПК. 12
1.3 Преимущества и недостатки ПК. 13
1.4 Сбор пуповинной крови. 15
1.4.1. Обследование беременной. 15
1.4.2. Методы забора ПК. 16
1.5. Краткосрочное хранение ПК. 18
1.6. Предварительное обследование ПК. 19
1.7. Оценка потенциала стволовых клеток. Сравнительная характеристика с КМ и ПСК. 20
1.7.1. Клеточность. 22
1.7.2. CD34+. 23
1.73. КОЕ-ГМ. 23
1.8. Выделение стволовых клеток из ПК. 25
1.9. Криоконсервирование гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови. 26
1.9.1. Криопротекторы. 27
1.9.2. Замораживание. 29
1.9.3. Долгосрочное хранение. 30
1.9.4. Размораживание. 31
1.10. Архивирование биоматериала. 32
Глава П. Объекты, материалы и методы. 34
2.1. Объект и материалы исследования. 34
2.2. Методика сбора пуповинной крови. 34
2.3. Методика фракционирования пуповинной крови. 36
2.4. Методика криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови. 37
2.5. Лабораторные методы исследования. 39
2.5.1. Определение содержания форменных элементов. 39
2.5.2. Подсчет лейкоцитарной формулы. 40
2.5.3. Определение клеток с имунофенотнпом CD34+. 40
2.5.4. Определение гранулоцитарно-моноцитарных клеток-предшественниц. 40
2.5.5. Определение жизнеспособности клеток. 41
2.5.6. Определение бактериального загрязнения крови. 41
25.7. Выявление ДНК возбудителей Neisseria gonorrhoeae, Toxplasma gondii и цитомегаловируса. 42
2.5.8. Определение наличия антител к ВИЧ-1/2,, HbsAg, антител к вирусу гепатита С. 43
2.5.9. Определение наличия антител к бледной трепонеме (серодиагностика сифилиса). 43
2.5.10. Компьютерная морфометрия форменных элементов ПК. 43
2.6. Измерение температуры биоматериала и крнобокса. 44
2.7. Методика создания компьютерной базы данных для архивирования пуповинной крови, находящейся на длительном хранении. 44
2.8. Методы статистической обработки результатов. 45
Глава III. Результаты исследования и их обсуждение. 47
3.1. Сбор пуповинной крови. 47
3.2. Краткосрочное хранение пуповинной крови. 58
3.3. Выделение клеточной фракции. 59
3.4. Криоконсервнрование пуповинной крови . 67
3.5. Динамика показателей ПК в процессе её сбора, сепарации икриоконсервации. 78
3.6. Арживирование пуповинной крови. 79
Глава IV. Заключение. 87
Выводы. 90
Приложение 1 93
Приложение 2 98
Библиография. 103
