Введение
Глава 1 Обзор литературы 9
1.1 Строение роговицы 9
1.1.1 Передний эпителий роговицы 11
1.1.2 Строма 12
1.1.3 Задний эпителий 21
1.2 Создание искусственной роговицы 23
1.2.1 Характеристика клеток 23
1.2.2 Полимерные материалы 27
1.2.3 Биосинтетические материалы 29
1.2.4 Фиброин шелка 30
Глава 2 Материалы и методы экспериментальных исследований 32
2.1 Первый этап. Выделение первичной клеточной культуры кератоцитов и клеток заднего эпителия 33
2.1.1 Выделение первичной клеточной культуры кератоцитов 34
2.1.2 Выделение клеток заднего эпителия роговицы 35
2.2 Второй этап. Подбор питательной среды для клеточных культур 35
2.2.1 Подбор питательной среды для 2D культуры кератоцитов 36
2.2.2 Подбор питательной среды для 2D культуры клеток заднего эпителия роговицы 37
2.2.3 2D культивирование полученных клеточных культур 37
2.2.4 Криоконсервация/Дефростация клеточных культур кератоцитов и клеток заднего эпителия роговицы 38
2.3 Третий этап. 3D клеточное культивирование 38
2.3.1 Определение жизнеспособности полученных 2D и 3D клеточных культур 40
2.3.2 Проведение иммуноцитологического исследования полученных 2D и 3D клеточных культур 40
2.4 Четвертый этап. 2D культивирование кератоцитов на полимерных материалах 43
2.5 Пятый этап. 2D и 3D культивирование кератоцитов на фиброине шелка 45
2.5.1 Метод «ДНК-комет» 45
2.5.2 Определение раннего апоптоза 46
2.6 Обработка количественных данных 46
2.7 Перечень используемого лабораторного оборудования и расходных материалов 47
Глава 3. Результаты 50
3.1 Получение первичной клеточной культуры 50
3.1.1 Кератоциты 50
3.1.2 Клетки заднего эпителия роговицы 53
3.2 Подбор питательной среды для клеточных культур 53
3.2.1 2D культивирование кератоцитов 53
3.2.2 2D культивирование клеток заднего эпителия роговицы 68
3.3 3D культивирование 76
3.3.1 3D культивирование кератоцитов 76
3.3.2 3D культивирование сфероидов клеток заднего эпителия роговицы 96
3.4 2D культивирование кератоцитов на полимерных материалах 100
3.5 Культивирование кератоцитов на фиброине шелка 102
Заключение 107
Выводы 116
Основные обозначения и сокращения 118
Библиография 119
