Введение
1. Обзор литературы, молекулярные механизмы взаимодействия опухоли и иммунной системы 12
1.1. Общие закономерности взаимодействия опухоли и иммунной системы 12
1.2. Причины иммуногенности опухолевых клеток и стратегии иммунного распознавания опухолей 15
1.3. Распознавание опухолей Т-лимфоцитами 21
1.4. Опухолевые антигены как мишень противоопухолевой иммунотерапии 24
1.4.1. Опухолевые антигены - продукты онкобелков и мутированных опухолевых супрессоров 25
1.4.2. Опухолевые антигены, происходящие из молекул, создающих селективное преимущество для опухолевой клетки 26
1.4.3. Опухолевые антигены, появляющиеся в результате нестабильности генома опухолевой клетки и опухолевой катаплазии 27
1.5. Формирование и реализация противоопухолевого иммунного ответа 28
1.6. Принципы рациональной иммунотерапии опухолей 37
1.7. Механизм действия цельноклеточных противоопухолевых вакцин, секретирующих ГМ-КСФ 39
1.8. Разновидности цельноклеточных противоопухолевых вакцин, секретирующих ГМ-КСФ 41
1.9. Комбинирование как способ повышения эффективности вакцинотерапии опухолей49
2. Материалы и методы 53
2.1. Клеточные линии и их культивирование 53
2.2. Трансфекция и получение стабильно трансфицированных клонов 54
2.3. Определение ГМ-КСФ в супернатантах клеточных линий 54
2.4. Инактивация клеток ионизирующим облучением 55
2.5. Определение жизнеспособности и пролиферативной активности клеток 56
2.6. Экспериментальные животные 56
2.7. Схемы иммунизации мышей и трансплантации опухолевых клеток 57
2.8. Иммунизация мышей 58
2.9. Трансплантация опухолевых клеток и учет динамики роста опухоли 58
2.10. Статистическая обработка результатов 59
3. Результаты исследований и их обсуждение 60
3.1. Получение и характеристика цельноклеточной вакцины 60
3.1.1. Получение стабильно трансфицированных клонов клеток меланомы B16-F10 и меланомы Клаудмана891-М3 61
3.1.2. Изучение влияния гамма-облучения на пролиферативный потенциал стабильно трансфицированных клеток 62
3.1.3. Влияние гамма-облучения на секрецию ГМ-КСФ стабильно трансфицированными опухолевыми клетками 65
3.1.4. Влияние секреции рекомбинантного ГМ-КСФ на туморогенность клеток стабильно трансфицированных клонов 66
3.1.5. Обсуждение полученных результатов 68
3.1.6. Заключение по разделу 70
3.2. Сравнение эффективности иммунотерапии цельноклеточными ГМ-КСФ-
секретирующими вакцинами опухолей различной иммуногенности 71
3.2.1. Изучение эффективности противоопухолевой вакцинации клетками BG10 в сингенной системе 71
3.2.2. Изучение эффективности противоопухолевой вакцинации клетками BG10 в аллогенной системе 72
3.2.3. Изучение эффективности противоопухолевой иммунизации вакциной на основе клеток MG10 в сингенной системе 74
3.2.4. Изучение эффективности противоопухолевой иммунизации вакциной на основе клеток MG10 в аллогенной системе 75
3.2.5. Изучение противоопухолевого эффекта вакцин на основе клеток BG10 и MG10 на гибридных мышах BDF1 77
3.2.6. Обсуждение полученных результатов 79
3.2.7 Заключение по разделу 83
3.3. Изучение факторов, обуславливающих эффективность противоопухолевой иммунотерапии ГМ-КСФ-секретирующими клеточными вакцинами в режиме профилактического применения 84
3.3.1. Влияние кратности иммунизации на противоопухолевый эффект 84
3.3.2. Влияние количества секретируемого клетками вакцины ГМ-КСФ на эффективность сингенной противоопухолевой вакцинации 85
3.3.3. Влияние количества секретируемого клетками вакцины ГМ-КСФ на эффективность аллогенной иммунопрофилактики меланомы B16-F10 86
3.3.4. Влияние режима вакцинации на противоопухолевый эффект 88
3.3.5. Обсуждение результатов 90
3.3.6. Заключение по разделу 94
3.4. Увеличение эффективности противоопухолевой вакцинотерапии путем комплексного применения различных клеточных линий в составе вакцины 95
3.4.1. Повышение эффективности аллогенной иммунизации за счет введения в состав вакцины сингенных опухолевых клеток 95
3.4.2. Изучение влияния источника рекомбинантного цитокина при вакцинации смесью нескольких линий 96
3.4.3. Увеличение эффективности противоопухолевой вакцинации при помощи сочетания в составе вакцины линий продуцирующих различные цитокины 98
3.4.4. Изучение продолжительности эффекта комбинированной противоопухолевой вакцинации и возможностей пролонгировать эффект повторным введением вакцины 99
3.4.6. Заключение по разделу 106
4. Заключение 107
5. Выводы по
Список литературы 111
