Введение
I. Литературный обзор 8
1.1 Способы получения аденозинфосфатов 8
1.2 Биотрансформация аденозина до аденозинфосфатов 11
1.3 Механизмы биотрансформации аденозина до аденозинфосфатов. 13
1.4 Факторы, определяющие характер и степень биотрансформации аденозина в аденозинфосфаты. 17
1.5 Состав и структура клеточных мембран 18
1.6 Примеры использования микроорганизмов с измененной клеточной проницаемостью. 20
1.7 Механизм воздействия толуола на клеточные мембраны 21
1.8 Степень воздействия толуола на микроорганизмы. 22
1.9 Практическое применение биотрансформации аденозина до аденозинфосфатов 26
1.9.1 Использование иммобилизованных клеток для проведения биотрансформаций. 32
II. Материалы и методы 42
III. Экспериментальная часть 50
3.1 Методы повышения проницаемости клеточных мембран 50
3.2 Фосфорилирование на уровне субстрата 52
3.3 Определение оптимального времени воздействия толуола на клетки дрожжей рода Saccharomyces cerevisiae при иотрансформации аденозина до аденозинфосфатов. 54
3.4 Оценка жизнеспособности клеток дрожжей, обработанных толуолом. 56
3.5 Изучение кинетики роста клеток дрожжей Saccharomyces cerevisiae, обработанных различными концентрациями толуола. 58
3.5.1 Кинетические характеристики роста клеток дрожжей, подвергнутых воздействию толуола на начальной стадии роста . 59
3.5.2 Кинетические характеристики роста клеток дрожжей, подвергнутых воздействию толуола в активной фазе роста. 65
3.6 Изучение ферментативной активности клеток дрожжей, обработанных различными концентрациями толуола. 69
3.7 Определение степени влияния воздействия толуола на ферментные системы дрожжей. 75
3.8 Оценка способности к самовоспроизводству клеток дрожжей Saccharomyces cerevisiae, после воздействия на них толуола. 78
3.9 Биотрансформация аденозина в АТФ, АДФ и АМФ дрожжами Saccharomyces cerevisiae SL-100 в процессе их роста. 80
3.9.1 Биотрансформация аденозина в АТФ, АДФ и АМФ клетками дрожжей без внесения толуола. 81
3.92 Кинетика накопления АТФ в культуральной жидкости 83
3.93 Кинетика накопления АДФ в культуральной жидкости 84
3.94 Кинетика накопления АМФ в культуральной жидкости 85
4. Использование иммобилизованных клеток дрожжей рода Saccharomyces cerevisiae для процесса биотрансформации аденозина до аденозинфосфатов 91
4.1 Определение метаболической активности иммобилизованных клеток дрожжей 92
4.2 Влияние количества клеток внутри гранул геля на метаболическую активность. 94
4.3 Определение метаболической активности иммобилизованных клеток дрожжей в трех циклах. 95
4.31 Метаболическая активность иммобилизованных клеток в первом цикле. 96
4.32 Метаболическая активность иммобилизованных клеток во втором цикле. 97
4.33 Метаболическая активность иммобилизованных клеток в третьем цикле . 99
4.4 Изучение влияния концентрации субстрата на метаболическую активность иммобилизованных клеток дрожжей. 104
4.5 Изучение влияния толуола на метаболическую активность иммобилизованных клеток дрожжей. 106
5. Биосинтез аденозинфосфатов из аденозина иммобилизованными клетками дрожжей 109
5.1 Использование иммобилизованных клеток дрожжей для многократного применения в процессе биотрансформации аденозина до аденозинфосфатов. 110
5.2 Три серии биотрансформации аденозина в аденозинфосфаты. 111
5.3 Трехцикловая биотрансформация аденозина в аденозинфосфаты с подращиванием иммобилизованных клеток после каждого цикла 113
5.4 Трехцикловая биотрансформация аденозина в аденозинфосфаты с подращиванием и обработкой толуолом иммобилизованных клеток после каждого цикла . 114
IV. Выводы 117
V. Список литературы 119
Приложение №1 129
